第八章培养基灭菌解析.pptVIP

* * * * * * * 在活化能大的反应中，反应速率随温度变化也大；反之，如果某一反应的活化能非常小，那么该反应的速度随温度的变化也很小。所以当温度升高时，杂菌死亡速度要比营养成分破坏速度快得多。根据这一道理，培养基灭菌采用高温短时的方法，可以减少营养成分的破坏。养分虽因温度增高破坏也增加，但因灭菌时间大为缩短，总破坏量因之减少。 灭菌温度(℃) 灭菌时间(min) VB1损失(%) 100 843 99.99 110 75 89 115 15 50 120 7.6 27 130 0.851 10 140 0.107 3 150 0.015 1 2、微生物的耐热性 无芽孢的细菌在60℃加热60min或70℃加热5min即可杀死，霉菌孢子在86～88℃加热3min也可杀死。但是有些细菌芽孢的热阻较大，100℃处理30min仍未杀死。 培养基中含有各种各样的微生物，不可能逐一地加以考虑。在灭菌计算中，如将全部微生物作为耐热的细菌芽孢来计算灭菌温度和时间，这样就势必加长加热时间和提高加热温度。 灭菌所需要的时间取决于把活的细菌芽孢减少到所规定数目的时间。同时，由于一个细菌只能形成一个芽孢，故把培养基中原有芽孢细菌和细菌芽孢数之和作为计算依据较为合理。 3、pH值 pH值对微生物的耐热性影响很大，pH=6.0～8.0时，微生物最不易死亡，pH＜6.0时，H+很易渗入微生物的细胞，从而改变细胞的生理反应，促使其死亡。所以，培养基的pH值愈低，所需的灭菌时间也愈短。但一般情况下，微生物对培养基的pH值都有一定的要求，在不允许调节pH值的情况下，就要适当考虑延长维持时间或提高灭菌温度。 温度(℃) 孢子数(个/mL) 灭菌时间(min) pH=6.1 5.3 5.0 4.7 4.5 120 10,000 8 7 5 3 3 115 10,000 25 25 12 13 13 110 10,000 70 65 35 30 24 100 10,000 740 720 180 150 150 4、培养基成分 油脂、糖类及一定浓度的蛋白质会增加生物的耐热性。高浓度的有机物会包于细胞周围，形成一层薄膜影响热的传入，所以灭菌温度应较高。而高浓度的盐类(8～10%以上)、色素则削弱其耐热性，故较易灭菌。例如，大肠杆菌在水中加热至60～65℃便死亡，在10%糖液中需70℃加热4～6min才死亡，在30%糖液中需要30min才死亡。 5、泡沫 培养基中发生的泡沫对灭菌极为不利，因为泡沫中的空气形成隔热层，使热量难以渗透进去，杀死其中潜伏的微生物。在分批灭菌中，对极易起泡的培养基必须予以很好的控制。若产生泡沫要采取措施加以破坏，如可加入少量消泡剂。对极易产生泡沫的培养基，如采用连续灭菌的方法更应注意。 6、颗粒 培养基中含的颗粒小，容易灭菌，颗粒大时，则难灭菌，对于含有＜1mm颗粒的培养基，一般采用根据计算所定的灭菌温度和时间，而不必提高；对于含有少量较大颗粒及粗纤维的培养基，可用粗滤方法(不应影响培养基质量)予以除去。培养基结块会造成灭菌的不彻底，必须注意。 第三节 分批灭菌的计算 一、基础条件的确定 1、污染度N0:灭菌开始时，污染的培养基中的杂菌个数(个/mL)，也称为原始污染度。前已指出，不能对培养基中的各种微生物逐一考虑，N0应取原有芽孢细菌数和细菌芽孢数之和。一般假定N0为104～106个/mL。 2、灭菌度Ns：经过灭菌时间t后，培养基中残存的活菌个数(个/mL)，也称为杀菌程度。若要求灭菌后绝对无菌，即Ns=0，则从对数残留方程式可以看出，灭菌时间t将等于无穷大(∞)，这是不可能的，也是不必要的。因此，要设计一台杀菌设备，必须确定在给定的发酵中所允许的残余污染度。也就是说，培养液灭菌后，以在培养液中还残留一定的活菌数来进行计算。工程上，通常可设Ns=10-3个/罐，即微生物污染降低到被处理的1000罐中只残留一个活微生物的程度，此数已满足生产的要求。故实际计算时，只要求出Ns=10-3时的杀菌时间即可。 3、污染菌的热死特性：一般在设计时需要了解残留活菌数N与杀菌温度T和时间t的关系。某种最耐热的细菌芽孢，在121℃时的K值只有0.4min-1。 如用这个数值计算灭菌温度和时间，将使温度和时间增高很多。由于这种最耐热的芽孢一般很少发现，所以在灭菌计算时不是把所有细菌当作最耐热的芽孢来考虑，而是用一般耐热的细菌芽孢的K值来计算这个过程。如果培养基中含有较多量的这种耐热细菌芽孢，那么常规的121℃灭菌温度是不够的，要将其提高到接近140℃方可。 通常设计时可设在115