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2016-05-10 发布于安徽
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不对称还原制备光学纯(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的双酶共表达重组菌的构建.pdf

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不对称还原制备光学纯(R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的双酶共表达重组菌的构建.pdf

2012 Chinese Journal of Catalysis Vol. 33 No. 10 文章编号: 0253-9837(2012)10-1650-11 国际版DOI : 10.1016/S1872-2067(11)60436-1 研究论文: 1650–1660 不对称还原制备光学纯 (R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的双酶共表达重组菌的构建 * 宿宇宁, 倪晔, 王骏超, 徐志豪, 孙志浩江南大学生物工程学院, 工业生物技术教育部重点实验室, 江苏无锡 214122 摘要: 克隆了来自于枯草芽孢杆菌的羰基还原酶基因 IolS 和葡萄糖脱氢酶基因 GDH, 采用 Ni-NTA 镍亲和层析柱对重组蛋白 IolS 进行纯化, 并对纯酶进行了酶学性质研究. 结果表明, 该羰基还原酶的最适温度和 pH 值分别为 30 oC 和 6.0; 在 40 oC 以下具有较好的热稳定性; 在 pH 5.5−7.0 的偏酸性范围内能保持 75% 以上的酶活. 采用三种策略构建了 IolS 和 GDH 的共表达重组质粒, 结果发现, 采用双启动子的重组质粒能够实现羰基还原酶 IolS 的高效表达, 粗酶液中的 IolS 和 GDH 的比酶活均达到 1.5 U/mg. 运用该重组菌对 10 g/L 的 OPBE 进行不对称还原, 反应 15 h 后, 底物转化率大于 99%, 产物 (R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯的 ee 值达到 99.5%. 关键词: 羰基还原酶; 葡萄糖脱氢酶; 共表达; (R)-2-羟基-4-苯基丁酸乙酯; 不对称还原中图分类号: O643 文献标识码: A 收稿日期: 2012-04-26. 接受日期: 2012-06-24. *通讯联系人. 电话/传真: (0510 电子信箱: yni@ 基金来源: 国家重点基础研究发展计划 (973 计划, 2011CB710800); 新世纪优秀人才支持计划 (NCET-11-0658); 江苏省自然科学基金 (BK2011150); 高等学校学科创新引智计划(111 计划, 111-2-06); 江苏高校优势学科建设工程. 本文的英文电子版( 国际版) 由Elsevier 出版社在ScienceDirect上出版(/science/journal. Two-Enzyme Coexpressed Recombinant Strain for Asymmetric Synthesis of Ethyl (R)-2-Hydroxy-4-phenylbutyrate * SU Yuning, NI Ye , WANG Junchao, XU Zhihao, SUN Zhihao The Key Laboratory of Industrial Biotechnology, Ministry of Education, School of Biotechnology, Jiangnan University,