银杏叶提取物对哮喘大鼠的治疗作用及相关机制的研究.pdf

银杏叶提取物对哮喘大鼠的治疗作用 及相关机制的研究 摘 要 bioba 目的：通过用银杏叶提取物(ginkgo 哮喘大鼠模型，观察哮喘大鼠气道上皮细胞中基质金属蛋白酶 ．9(matrix inhibitorof ．1(tissue 响和降低气道炎症，改善气道重构的作用，为Egb761治疗哮喘提供 理论基础和实验依据。方法：1．实验动物的分组：健康SPF级SD 大鼠60只，雌雄不拘，周龄(4-6周)，体重180±20g，用随机数字表 法将实验动物随机分为5组，每组12只，即正常对照组(A组)，哮喘 氢氧化铝200 ml生理盐水配成10％卵蛋白氢氧化铝凝胶于模 mg加1 ml上述混合 型制作的第1天和第8天，分别给每只大鼠腹腔注射1 液。2周后，分组将大鼠置于密闭的有机玻璃箱内，每天以1％卵蛋 白雾化吸入20分钟，激发哮喘2周，共4周。其中A组所有处理用 生理盐水代替，c、D、E组每次雾化前1小时，分别将下述的药物 灌胃2周，C组给予地塞米松1 200 mg／kg／d灌胃，D组给予Egb761 50 mg／kg／d灌胃，E组给予Egb761mg／kg／d灌胃，A组和B组则仅给 予生理盐水4ml灌胃。3．取材与染色：末次激发后24小时内用3％ 戊巴比妥钠40mg／kg腹腔注射后开胸，经右心室插管到肺动脉，用 含1％的肝素无菌生理盐水快速冲洗肺血管床。同时，气管插管至左 肺，并用生理盐水灌洗左侧肺，回收灌洗液并滤去沉渣，将灌洗液离 ml 心后，、细胞凰重悬于1 PBS液中，并调整缩胞密度为1．oxi06／ml， 在细胞计数板上计数细胞总数，取已调整细胞数的BALF 50／tl，作细 胞涂片，经HE染色后在高倍镜下每张切片计数200个细胞，并进行 细胞分类计数，计算BALF中各种细胞的百分率。同时，取右肺中叶 置于4％的多聚甲醛溶液中固定后，进行脱水，透明，浸蜡，包埋， 切片，片厚为4“m，一部分切片按HE常规染色步骤染色，另一部分 切片作免疫组化处理。4．免疫组化及图象分析：用免疫组化的方法 Plus图像分析软件，测算各组气道上皮细胞胞浆中MMP．9及TIMP．1 的阳性表达产物的平均光密度(0D)值。同时，用计算机病理图象分析 系统测量气道形态学参数值，即细支气管基底膜周径(Pbm)、总管壁 层的厚度。5．统计学处理方法：所有计量资料以均数4-标准差f蕈4-1) 表示，用SPSSll．5等统计软件对统计结果进行统计分析。结果：1．哮 喘大鼠的一般情况：用OVA致敏激发大鼠后发现哮喘模型大鼠呼吸 急促，烦躁不安，腹式呼吸明显，部分大鼠尚可闻及哮鸣音，呼吸困 难，唇爪有不同程度的紫绀；地塞米松组及Egb761大、小剂量组上 述症状有不同程度的减轻，而正常组大鼠的呼吸、饮食活动及精神状 态等无明显异常。2．BALF检查结果：正常组BALF中偶见炎性细胞 和部分脱落的支气管上皮细胞；哮喘组可见大量的炎性细胞浸润，尤 其以嗜酸性粒细胞、淋巴细胞等浸润明显；地塞米松组及Egb761大、 小剂量组炎性细胞浸润较哮喘组明显减少。炎性细胞总数和嗜酸性粒 细胞及淋巴细胞百分数，经统计学处理，哮喘组明显高于正常组、地 变化：光镜下可见正常组支气管、肺组织结构正常，‘各级支气管上皮 完整，肺泡间隔正常，无明显炎性细胞浸润。而哮喘组大鼠可见其气 道黏膜水肿、黏膜皱襞增多、黏膜下及管周有大量的炎性细胞浸润、 气道上皮细胞脱落、杯状细胞增多、细支气管的气道壁、平滑肌层及 基底膜等明显增厚、管腔变窄，而地塞米松组及Egb761大、小剂量 组较哮喘组有不同程度的减轻，且Egb761大剂量组减轻的程度优于 小剂量组。4．免疫组化结果：正常组MMP一9及TIM