基于CTC-流式细胞仪活性细菌总数的快速检测技术研究.pdfVIP

第 ３３ 卷第９ 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Ｖｏｌ.３３ꎬＮｏ.９ ２０１３年９月 　Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅ Ｓｅｐ. ꎬ２０１３ 林怡雯ꎬ杨天ꎬ李丹ꎬ等.２０１３.基于ＣＴＣ￣流式细胞仪活性细菌总数的快速检测技术研究[Ｊ].环境科学学报ꎬ３３(９):２５１１￣２５１５ Ｌｉｎ Ｙ ＷꎬＹａｎｇ ＴꎬＬｉ Ｄꎬｅｔ ａｌ. ２０１３.Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉａｂｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｂｙ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＣＴＣ (５￣Ｃｙａｎｏ￣２ꎬ３￣ｄｉｔｏｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ) ｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｓｓａｙ (ＣＴＣ￣ＦＣＭ)[Ｊ].Ａｃｔａ Ｓｃｉｅｎｔｉａｅ Ｃｉｒｃｕｍｓｔａｎｔｉａｅꎬ３３(９):２５１１￣２５１５ 基于ＣＴＣ￣流式细胞仪活性细菌总数的快速检测技术 研究 ∗ 林怡雯ꎬ杨天ꎬ李丹 ꎬ何苗 清华大学环境学院ꎬ环境模拟与污染控制国家重点联合实验室ꎬ北京１０００８４ 收稿日期:２０１２￣１１￣２７　 　 　 修回日期:２０１３￣０１￣０４　 　 　 录用日期:２０１３￣０１￣０４ 摘要:以大肠杆菌作为研究对象ꎬ建立一种５￣ｃｙａｎｏ￣２ꎬ３￣ｄｉｔｏｌｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍｃｈｌｏｒｉｄｅ(ＣＴＣ)染色结合流式细胞仪(ＣＴＣ￣ＦＣＭ)的方法ꎬ以选择性检测 水环境中具有代谢活性的细菌总数.该方法的原理是细菌与具有氧化还原性的染料ＣＴＣ发生反应ꎬ形成红色荧光物质ꎬ被流式细胞仪特异性 －１ 识别进而可选择性检测活性菌.研究结果表明ꎬＣＴＣ染色的最佳反应条件为:ＣＴＣ浓度为２ ｍｍｏｌＬ 、３７ ℃避光孵育３ ｈ.该方法最低检测限为 ３ －１ １０ 个 ｍＬ .通过比较培养法和ＣＴＣ￣ＦＣＭ方法检测热灭活后的大肠杆菌ꎬ结果表明ＣＴＣ￣ＦＣＭ方法可准确区分活性菌和灭活菌ꎬ且与培养法 ２ ２ 之间具有较好的线性关系(Ｒ ＝０.９４６５). 应用 ＣＴＣ￣ＦＣＭ 方法检测实际样品ꎬ结果显示该方法与培养法之间有较好的线性关系(Ｒ ＝ ０８１２１).本研究建立的ＣＴＣ￣ＦＣＭ方法可满足饮用水水质标准需求ꎬ且检测时间比平板培养法缩短２０ ~４０ ｈꎬ可以用于环境水样中活性细菌总 数检测. 关键词:ＣＴＣ(５￣ｃｙａｎｏ￣２ꎬ３￣ｄｉｔｏｌｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ)染料ꎻ流式细胞仪ꎻ活性细菌总数ꎻ实际环境水样ꎻ快速检测 文章编号:０２５３￣２４６８(２０１３)０９￣２５１１￣０５　 　 　 中图分类号:Ｘ１７２ꎬＸ８３２　 　 　 文献标识码:Ａ Ｒａｐｉｄ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ ｖｉａｂｌｅ ｂａｃｔｅｒｉａ ｂｙ ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＣＴＣ (５￣Ｃｙａｎｏ￣２ꎬ３￣ｄｉｔｏｙｌ ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ ｃｈｌｏｒｉｄｅ) ｄｙｉｎｇ ａｎｄ ｆｌｏｗ ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ ａｓｓａｙ (ＣＴＣ￣ＦＣＭ) ∗ ＬＩＮ ＹｉｗｅｎꎬＹＡＮＧＴｉａｎꎬＬＩ Ｄａｎ ꎬＨＥ Ｍｉａｏ Ｓｔａｔｅ Ｋｅｙ Ｊｏｉｎｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｓｉｍｕｌａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｐｏｌｌｕｔｉｏｎ ＣｏｎｔｒｏｌꎬＳｃｈｏｏｌ ｏｆ ＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔꎬＴｓｉｎｇｈｕａ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＢｅｉｊｉｎｇ １０００８４ Ｒｅｃｅｉｖｅｄ２７ Ｎｏｖｅｍｂｅｒ２０１２ꎻ　 　 　 ｒｅｃｅｉｖｅｄ ｉｎ ｒｅｖｉｓｅｄ ｆｏｒｍ４ Ｊａｎｕａｒｙ２０１３ꎻ　 　 　 ａｃｃｅｐｔｅｄ４ Ｊａｎｕａｒｙ２０１３ Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ａｎ ｉｎｔｅ