土壤环境中肠道致病菌的多重PCR检测研究初探.pdfVIP

第 33 卷第5 期 环　 境　 科　 学　 学　 报 Vol.33,No.5 2013年5月 　Acta Scientiae Circumstantiae May,2013 何伟,刘燕,李建林,等.2013.土壤环境中肠道致病菌的多重PCR检测研究初探[J].环境科学学报,33(5):1341-1346 HeW,Liu Y,LiJ L,et al. 2013.Detection of pathogenic enterobacteria in soil by multiplex-PCR [J].Acta Scientiae Circumstantiae,33(5):1341-1346 土壤环境中肠道致病菌的多重PCR检测研究初探 1,2 1 3 4 1,∗ 何伟 ,刘燕 ,李建林 ,尹睿 ,钟文辉 1. 南京师范大学地理科学学院,南京210023 2. 南京师范大学生命科学学院,南京210023 3. 南京师范大学金陵女子学院,南京210097 4. 土壤与农业可持续发展国家重点实验室(中国科学院南京土壤研究所),南京210008 收稿日期:2012-08-16　 　 　 修回日期:2012-10-19　 　 　 录用日期:2012-10-28 摘要:建立同时检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌等5种土壤常见肠道致病菌的多重PCR检测技术,为 这些肠道致病菌感染的快速诊断提供实验依据.根据这些肠道病原菌的毒素基因、高度保守基因及特异性基因分别合成5对特异性引物,应用 PCR扩增技术对目的菌株进行特异性检测.实验结果表明,5 对寡核苷酸引物都具有较高的特异性和专一性,多重 PCR 检测限达到 104 -1 cfu·g .多重PCR应用于土壤样品分析,极大的缩短了检测时间(仅需3~4 h)、降低了检测成本,对控制病原菌的传播具有重要意义,可推广 应用于环境监测、水源检测、食品卫生监督、商品检验检疫等领域. 关键词:多重PCR;大肠杆菌;沙门氏菌;金黄色葡萄球菌;福氏志贺氏菌;铜绿假单胞菌;土壤 文章编号:0253-2468(2013)05-1341-06　 　 　 中图分类号:X172　 　 　 文献标识码:A Detection of pathogenic enterobacteria in soil by multiplex-PCR 1,2 1 3 4 1,∗ HE Wei ,LIU Yan ,LI Jianlin ,YIN Rui ,ZHONG Wenhui 1. College of Geographical Science,Nanjing Normal University,Nanjing210023 2. College of Life Science,Nanjing Normal University,Nanjing210023 3. Ginling College,Nanjing Normal University,Nanjing210097 4. State Key Laboratory of Soil and Sustainable Agriculture,Institute of Soil Science,Chinese Academy of Sciences,Nanjing210008 Received 16 August2012;　 　 　 received in revised form 19 October2012;　 　 　 accepted28 October2012 Abstract:To provide an experimental evidencefor rapid diagnosis of those pathogenic infection,multiplex-PCR assay was conducted to simultaneously detect Escherichia coli,Salmonella,Staphylococcus aureus,Shigellafl