工程菌株选育讲稿介绍.docVIP

第一章 绪论 工业微生物育种在发酵工业中的地位 现代发酵工业之所以如此迅猛发展，除了发酵工艺改进和发酵设备更新之外，更重要的是由于菌种的选育和改良，工业微生物菌种选育在发酵工业中占有重要地位，是决定该发酵产品能否具有工业化价值及发酵过程成败与否的关键。为发酵工艺提供了人类需要的各种类型的突变菌株，从而使各种产品（如抗生素、酶制剂、氨基酸、有机酸等）的产量成倍甚至成千倍地增长，同时产品的质量不断提高。 因此，工业微生物育种对于提高发酵工业产品的产量和质量，进一步开发利用微生物资源，增加发酵工业产品的品种，具有重大意义。工业微生物育种的进展 野生型微生物经自然选择，能适应它的周围环境，能适应同其他物种的竞争，但却不能按人的意志生产人们需要的物质，因此从人类的利益出发，须对工业微生物菌种进行改良。 工业微生物育种是建立在遗传和变异的基础上的，没有变异，生物界将失去进化的素材；没有遗传，变异也无法积累。因此，工业微生物育种学是建立在微生物遗传学基础上，而二者是相辅相成的。工业微生物育种技术的发展经历了几个阶段 （一）自然选育：对工业微生物育种有很大的影响。例如 1、在酒精发酵中，推广了自然选育的纯系良种，扭转了酒精生产中的不稳定现象。 2、自然选育方法已沿用了多年，仍是工业微生物育种的手段之一。 3、由于自然突变频率低，单纯依赖自然界存在的微生物群体来进行的自然选育无疑有很大的局限性，进而推进了人工诱变育种的发展。 （二）诱变育种 1、发酵工业中的各种优良高产菌株绝大部分都是诱变育种方法获得的菌株 如青霉素产生菌的诱变 2、但是，菌株长期使用诱变剂处理后，会产生诱变剂疲劳效应，还会引起菌种生长周期的延长、孢子量减少和代谢减慢等现象，这对发酵工艺的控制是不利的。所以出现了杂交育种。 （三）杂交育种 、杂交育种也应当建立在诱变育种的基础上，没有诱变育种，杂交菌株的产量是难以提高的。 、杂交育种的主要目的在于把不同菌株的优良经济性状集中于重组体中，克服长期用诱变剂处理造成的上述缺陷，同时杂交还是增加产品新品种的手段之一。 （四）代谢控制育种 1、是以20世纪50年代谷氨酸发酵取得成功为起点的 2、代谢控制育种的活力在于以诱变育种为基础，获得各种解除或绕过了微生物正常代谢途径的突变株，从而人为地使有用产物选择性地大量生成和积累。 （五）基因工程育种 近年来，基因工程在工业微生物选育种得到迅猛发展。有许多基因改造育种的方法如基因组改组（是多亲本微生物之间发生重组）、分子定向技术（是一种DNA水平的分子定向化技术）、高通量筛选（核心是根据目的样品的特性，开发出盒式的筛选模型，将样品的这些特性转化成可以用摄像头计算机传感器识别的光信号或者电信号）等。 所以，育种工作者要充分掌握微生物学、生物化学、遗传学的基本原理和国内外有关的先进科学技术，灵活而巧妙地将其运用到育种中去，使菌种选育技术不断更新和发展。 第章 工业微生物产生菌的分离筛选 菌种是发酵工业的关键，只有具备了良好的菌种基础，才能通过改进发酵工艺和设备，得到理想的发酵产品。目前工业生产上应用的优良菌种，绝大多数都是从自然界分离得到的菌株。 微生物在自然界的分布及其广泛，且不同环境条件下生长的微生物也有不同的代谢类型和生理特性。 菌株分离的定义：是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对它们进行分离、筛选，进而得到所需微生物的过程。 菌株分离的几种途径和筛选：①向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。国内的中国微生物菌种保藏管理委员会②由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。③从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌等。 菌株的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离和鉴定几个步骤。 第一节 含微生物样品的采集 自然界含菌样品及其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、腐烂水果等都含有众多微生物。 一、从土壤中采样 土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方，所以土壤样品往往是首选的采集目标。 土壤中菌体含量： （一）根据土壤的特点 1、土壤有机质含量和通气状况 ①耕作土、菜园土和近郊土壤中，有机质含量丰富，营养充足，且土壤呈团粒结构，通气保水性好，适合于细菌、放线菌生长； ②山坡上的森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适合霉菌、酵母菌生长； ③沙土、无植被的山坡土、新开垦的生土及瘠薄土等，有机质含量少，微生物数量相对较少。 微生物主要集中在5-25cm的土层中。 2、土壤酸碱度和植被状况 ①土壤酸碱度会影响微生物种类的分布：⑴偏碱的土壤环境适合细菌、放线菌生长；⑵偏酸的土壤适合霉菌、酵母菌生长。 ②植物根部的分泌