Ang-2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响.docVIP

Ang-2在胃癌中的表达及其反义基因转染对人胃癌细胞SGC-7901的影响 曾松1，王继见1，朱鹏1 （1.重庆医科大学附属第二医院普外科，重庆，400010） 【摘 要】目的：探讨促血管生成素-2(Angiopoietin-2，Ang-2)在胃癌组织中的表达及其与肿瘤病理分期的联系；观察反义 Ang-2基因转染对人胃癌细胞 SGC-7901的影响。方法：用 Western Blot法检测 Ang-2蛋白在 10例胃癌组织及 10例正常胃组织中的表达，用免疫组化法检测 53例不同病理分期的胃癌组织中 Ang-2蛋白的表达；应用脂质体转染法将既往实验合成[1]的 pEGFP-N1-anti Ang-2转染体外培养的人胃癌细胞 SGC-7901，以空载体(pEGFP-N1 )转染组和未转染组作对照， RT-PCR及免疫组化检测转染后 Ang-2基因及蛋白的表达， MTT法和流氏细胞术检测反义 Ang-2基因转染对细胞生长和细胞调亡的影响；分别用上述三组细胞注射于裸鼠皮下，对比观察肿瘤生成的速度和肿瘤组织中的血管生成数量。结果：Ang-2蛋白在正常胃组织中不表达，在不同病理分期的胃癌组织中均成呈阳性表达（F=166.76，P＜0.0001）；RT-PCR及免疫组化显示反义Ang-2基因转染组无 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达，MTT法检测显示反义 Ang-2基因转染组细胞体外增殖能力明显低于其他两组（F=10.39，P=0.0024），流氏细胞术检测显示活细胞比率明显低于其它两组（χ2=3188.9805，P＜0.0001）；转染了反义 Ang-2基因的胃癌细胞成瘤速度较其它两组明显减慢（第 6天（F=10.18，P=0.0005）、第18天（F=7.8，P=0.0021）及 第30天（F=79.58，P＜0.0001）），肿瘤组织中血管生成的数量较其它两组明显减少（第1周（F=15.18，P＜0.0001）、第2周（F=3.50，P=0.0444）、第3周（F=39.02，P＜0.0001））。结论：胃癌组织中 Ang-2的表达与胃癌血管生成及胃癌侵 袭能力密切相关；反义 Ang-2基因转染可封闭人胃癌细胞 SGC-7901中 Ang-2 mRNA及 Ang-2蛋白的表达，抑制其体外生长，促进其凋亡；并对其体外成瘤性及其新生血管的生成有明显的抑制作用。 【关键词】新生血管形成；促血管生成素-2；反义真核表达载体；人胃癌细胞株；基因转染 The expression of angiopoinet-2 in gastric carcinoma and the effects of transfected by pEGFP-N1-anti-Ang-2 cDNA on human gastric carcinoma cell line SGC-7901 ZENG Song1，WANG ijian1，ZHU Peng （1．Department of General Surgery，Second Affiliated Hospital of Chongqing Medical University，Chongqing，400010，China） 【Abstract】Objective:To study the expression of Ang-2 in gastric carcinoma tissue, and its relation with pathological stage, To investigate the biological effects of antisense Ang-2 cDNA （pEGFP-N1-anti-Ang-2 cDNA）in human SGC-7901 gastric carcinoma cell line. Methods: Immunohistochemical method was used to detect the expression of Ang-2 protein in 53 samples of gastric carcinoma tissues, and western blot technique was used to the expression of Ang-2 protein in 10 samples of gastric carcinoma and 10 normal gastric tissues. Using the lipofectamine 2000 transfection technique, it were transferred separately two different plasmids indu