Bt-Cry5Aa基因转化棉花及其抗虫性鉴定.pdfVIP

植物遗传资源学报２０１４，１５（４）：８７７⁃８８１ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｐｌａｎｔ Ｇｅｎｅｔｉｃ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ＤＯＩ：１０．１３４３０／ ｊ．ｃｎｋｉ．ｊｐｇｒ．２０１４．０４．０２９ Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ基因转化棉花及其抗虫性鉴定 王　 峰，张秋平，陈金湘，周仲华，李　 博，贺　 文，张　 昊，李瑞莲 （湖南农业大学棉花研究所，长沙４１０１２８） 　 　 摘要：我国棉花抗虫基因大都为Ｃｒｙ１Ａｂ／ ｃ，抗性风险日趋增加。 本研究依据棉花密码子偏好，人工合成Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ抗虫基 因，通过花粉管通道法转入棉花，并通过卡那霉素法及ＰＣＲ方法对不同世代转化株进行鉴定，同时进行了抗虫性测试。 结果 表明，通过花粉管通道法成功获得转Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ基因植株，通过田间卡那霉素鉴定，阳性株率Ｔ 为７７６％，Ｔ 为７３１％，Ｔ 为 １ ２ ３ ９５５％；ＰＣＲ检测显示，Ｔ 阳性率为２３５％，Ｔ 为５５８％，Ｔ 为９４５％；田间抗性试验分析，转Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ株系对第２、３、４ 代棉 １ ２ ３ 铃虫校正死亡率分别达到８５４２％、７５３５％和６２７９％，其抗虫性与ＧＫ１９相比差异不显著；Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ 能够部分替代目前主流 鳞翅目抗虫基因，是棉铃虫的新抗源。 　 　 关键词：棉花；花粉管通道法；Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ基因；棉铃虫；抗虫性 Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ ｉｎ Ｃｏｔｔｏｎ ａｎｄ Ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｔｓ Ｉｎｓｅｃｔ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ＷＡＮＧ Ｆｅｎｇ，ＺＨＡＮＧ Ｑｉｕ⁃ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＪｉｎ⁃ｘｉａｎｇ，ＺＨＯＵ Ｚｈｏｎｇ⁃ｈｕａ， ＬＩ Ｂｏ，ＨＥ Ｗｅｎ，ＺＨＡＮＧ Ｈａｏ，ＬＩ Ｒｕｉ⁃ｌｉａｎ （ＣｏｔｔｏｎＲｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＨｕｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｓｈａ４１０１２８） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａｌｍｏｓｔ ａｌｌ ｉｎｓｅｃｔ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅｓａｐｐｌｉｅｄ ｉｎ Ｃｈｉｎａ ｉｓ Ｃｒｙ１Ａｂ／ ｃ ａｎｄ ｔｈｅ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｒｉｓｋ ｉｓｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ． Ｂｔ⁃Ｃｒｙ５Ａａ ｉｎｓｅｃｔ⁃ｒｅｓｉｓｔａｎｔ ｇｅｎｅ ｗａｓ ｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄ ａｃｃｏｒｄｉｎｇ ｔｏ ｔｈｅ ｃｏｄｏｎ ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｏｆ ｃｏｔｔｏｎ，ｉｔ ｗａｓ ｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ ｐｏｌｌｅｎ ｔｕｂｅ ｐａｔｈｗａｙ ｉｎｔｏ ｃｏｔｔｏｎ ｐｌａｎｔｓ，ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ ｔｈｒｏｕｇｈ Ｋａｎａｍｙｃｉｎ ｔｅｓｔ，ＰＣＲ ａｎｄ ｉｎｓｅｃｔ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ｔｅｓｔ ｆｏｒ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｉｎ ｔｈｅ ｐａｐｅｒ． Ｔｈｅ ｍａｉｎ ｒｅｓｕｌｔｓｗｅｒｅ ｓｈｏｗｎ ａｓｆｏｌｌｏｗｉｎｇ．Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｔｒａｎｓｇｅｎｉｃ ｐｌａｎｔｓ ｏｆ Ｂｔ⁃ Ｃｒｙ５Ａａｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄｂｙｐｏｌｌｅｎｔｕｂｅｐａｔｈｗａｙｍｅｔｈｏｄ，ａｎｄｇｅｎｅｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙｏｆＴ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ，Ｔ ｇｅｎｅｒ⁃ １ ２ ａｔｉｏｎ，ａｎｄ Ｔ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｗａｓ ７７６％，７３１％，ａｎｄ ９