白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层Bcl-2、Bax表达水平的影响.pdg.pdfVIP

目 录 中文摘要………………………………………………1 英文摘要………………………………………………5 水平的影响 前言……………………………………………．．10日U舌……………………………………………．．1U 材料与方法………………………………………．．11 结果……………………………………………．．18 附图……………………………………………．．20 讨论……………………………………………．．32 结论…………一…………………………………36 参考文献…………………………………………．36 综述细胞凋亡和神经变性病………………………………41 致谢…………………………………………………52 个人简历……………………………………………．．53 中文摘要 白藜芦醇对SODl．G93A小鼠腰髓和运动皮层 Bcl．2、Bax表达水平的影响 摘 要 lateral 目的：肌萎缩侧索硬化 Amyotrophic 进行性加重的，主要累及上、下运动神经元 主要包括脊髓、脑干、运动 皮层 的神经系统变性疾病，其典型临床表现为逐渐进展的肌肉无力、萎 缩，感觉系统及括约肌功能一般不受影响。随着疾病的进展，成人常在发 病后3-5年因累及呼吸肌而死亡，目前尚无有效的治疗手段。ALS分为两 种类型：散发型和家族型，散发型约占所有确诊病人的90％一95％，家族型 SODl 基因突变有关。目前关于ALS的病因及发病机制尚不是特别明 确，亦可能是多种机制共同参与，其中包括遗传、氧化应激反应、谷氨酸 兴奋毒性作用、线粒体功能障碍、异常蛋白质聚集和降解障碍、Ca+超载、 轴索运输障碍、细胞凋亡等。在前期，我们实验室详细介绍了线粒体功能 障碍包括线粒体分裂、融合以及线粒体自噬在ALS发展过程中变化及作 用，但是不管是线粒体分裂、融合、自噬，还是其他各种机制均有可能通 过诱发细胞凋亡途径导致ALS疾病发生和发展。 的生理过程。机体在生长发育过程中，细胞会新陈代谢，在产生新细胞同 时，发生突变或者老化细胞就可以通过细胞凋亡机制而被清除，从而维持 机体正常稳态及功能。细胞凋亡主要包括三种途径：死亡受体凋亡途径、 线粒体凋亡途径、内质网凋亡途径，而线粒体凋亡途径是目前研究热点。 Bcl．2家族主要作用位点在线粒体膜上，在线粒体凋亡途径中起重要作用。 Bcl．2家族蛋白分为抗凋亡蛋白以及促凋亡蛋白两类，其中Bcl．2属于众 多抗凋亡蛋白中的一种，Bax是促凋亡蛋白的一种，当细胞受到异常信号 刺激时，Bax构象发生变化，从胞质易位至线粒体外膜上，形成膜通道结 构导致细胞色素C的释放，从而引起细胞凋亡。有研究证实，在阿尔茨 disease diseasePD 、ALS 海默病 AlzheimerAD 、帕金森病 Parkinson 动物模型中，Bax、Bcl．2表达均发生了一定的变化。在ALS动物模型中， 中文摘要 通过抑制Bax基因表达，影响线粒体凋亡途径，不仅减少了运动神经元 的丢失，并且对于改善轴突变性、延长生存期也起到一定作用。白藜芦醇 是二苯基乙烯家族中一类多酚类化合物，在心血管疾病、癌症、衰老、神 经退行性疾病等方面具有有益作用。在朊蛋白病动物模型中，白藜芦醇能 够减少促凋亡蛋白Bax易位至线粒体外膜上，阻止细胞色素C的释放， 保护神经元。那么ALS同样作为一种神经变性病，随着其疾病进展，细 胞凋亡相关蛋白Bcl．2、Bax的表达发生了怎样变化?白藜芦醇对Bcl．2、 Bax又产生了怎样的影响?有待本实验进一步证实。 SODl．G93A转基因小鼠是目前研究ALS最为理想的动物模型之一。 动态变化情况；以及给予白藜芦醇处理后小鼠腰髓及运动皮层中两者表达 情况的变化；进一步探讨细胞凋亡在ALS发病过程中的作用；最后评估应 用白藜芦醇对ALS治疗可行性。 方法：选取SODl．G93A转基因小鼠为实验组，根据病程分为症状前 生型小鼠作为对照组，各组6只；处理组选取70dSODl．G93A转基因小 鼠，分为白藜芦醇组、溶剂组、空白组，每组根据给药时间不同分2个亚 组，每组6只，白藜芦醇组给予白藜芦醇乙醇溶液 30mg／kg／d 胃内灌注、 溶剂组给予同等体积的乙醇溶液胃内灌注、空白组不予任何处理，分别连 后取材，以1 腰髓及运动皮层迅速投入液氮冷冻，之后保存于．80℃冰箱；4％多聚甲醛 经心脏灌注，之后剥离小鼠腰髓及运动皮层，用4％多聚甲醛浸泡保存或 用2．5％戊二醛固定组织，利用Westernblot技术、免疫组织化学技术和激 动皮层中Bcl．2和Bax的变化情况。并利用spssl3．0对数据进行分析。 结果： 情况 中文摘要 达情况：通过免疫组织化学染色发现，与对照组相比，症