2015年版微生物限度检验操作规程详解.doc

青岛有限公司文件 文件名称 微生物限度检验操作规程 文件编号 SOP-ZL65- 制 定 人 审 核 人 审 核 人 制定日期 审核日期 审核日期 批 准 人 批准日期 生效日期 颁发部门 印 数 份 分发部门 目的 建立微生物限度检查操作规程，规范操作，保证结果的准确性。 范围 成品、辅料、内包装袋及纯化水的检验。 责任 微生物限度检验人员 内容依据中国药典201年版部1．微生物法系 2、计数方法 本法包括平皿法、薄膜过滤法。 3、计数培养基适用性检查和供试品计数方法适用性检查 供试品微生物计数中所使用的培养基应进行适用性检查。供试品的微生物计数方法应进行方法适用性试验，以确定采用的方法适合于该产品的微生物计数。 4、菌种及菌液的制备 4.1试验用菌的传代次数不得超过5代试验菌株 试验菌液的制备 计数培养基适用性检查 计数方法适用性试验 需氧菌总数霉菌和酵母菌总数 需氧菌总数 霉菌和酵母菌总数 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus [CCMCC(B) 26003] 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间18～24h 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu。 胰酪大豆胨琼脂培养基或胰酪大豆胨液体培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过3天，接种量不大于100cfu。 铜绿假单胞菌Pseudomonas aeruginosa [CMCC(B) 10104] 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [CMCC(B) 63501] 白色念珠菌Candida albicans [CMCC(F) 98001] 沙氏葡萄糖琼脂培养基或沙氏葡萄糖液体培养基，培养温度20～25℃，培养时间2～3天 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 胰酪大豆胨琼脂培养基，培养温度30～35℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 沙氏葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间不超过5天，接种量不大于100cfu。 黑曲霉菌Aspergillus niger [CMCC(F) 98003] 沙氏葡萄糖琼脂培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养基，培养温度20～25℃，培养时间5～7天，或直到获得丰富的孢子 供试品℃。供试液从制备到加入检验用培养基不得超过1小时。 5.1.1成品、辅料供试液的制备 取供试品，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲溶液，。内包装膜、袋：取供试品100cm2，剪碎，加PH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液，浸泡，振摇，1:10供试液。 5.2接种和稀释 按下列要求进行供试液的接种和稀释，制备微生物回收试验用供试液。所加菌液的体积应不超过供试液体积的1%。为确认供试品中微生物能被充分检出，应首先选择最低稀释级的供试液进行计数方法适用性试验。 5.2.1试验组 取上述制备好的供试液，加入试验菌液，混匀，使每1ml供试液所含菌量不大于100cfu。 5.2.2供试品对照组 取制备好的供试液，以稀释液代替菌液同试验组操作。 5.2.3菌液对照组 取不含中和剂及灭活剂的相应稀释液替代供试液，按试验组操作加入试验菌液并进行微生物回收试验。 5.3供试品中微生物的回收 表1所列的计数方法适用性试验的各试验菌应逐一进行微生物回收，微生物回收采用平皿法。 5.3.1平皿法 采用倾注法，表1中每株试验菌每种培养基至少制备2个平皿。取照上述“供试液的制备”和“接种和稀释”制备的供试液1ml，置直径90mm的无菌平皿中，注入15-20ml温度不超过45℃熔化的胰酪大豆胨琼脂或沙氏葡萄糖琼脂培养基，混匀，凝固，倒置培养、计数。同法测定供试品对照组及菌液对照组菌液，计算各试验组的平均菌落数。 5.3.2薄膜过滤法 采用的滤膜孔径不大于0.45um。滤膜直径一般为50mm滤器及滤膜使用前应采用适宜的方法灭菌。使用时，应保证滤膜在过滤前后的完整性。水溶性供试液过滤前先将少量的冲洗液过滤以润湿滤膜。为发挥滤膜的最大过滤效率，应注意保持供试品溶液及冲洗液覆盖整个滤膜表面。供试液经薄膜过滤后，若需要用冲洗液冲洗滤膜，每张滤膜每次冲洗量不超过100ml，总冲洗量不得超过1000ml；滤膜上的微生物受损伤。过滤一般随机抽2个最小包装平板倒置于30～35℃培养箱中培养3～天。平板倒置于20～2℃培养箱中培养5～天，观察菌落生长情况，点计菌落数。菌数报告规则宜选取平均菌落数小于