细胞周期G1期调控分子在白血病细胞、淋巴瘤细胞以及CD34+细胞增殖、分化、凋亡中的作用.pdf

复口人学眶学博f学位论史 中文摘要 肿瘤细胞不同于正常细胞的特征在于其不断的自我复制、顽固的逆分化和凋 11：。细胞增殖失控是肿瘤发生的重要环节，与细胞周期调控紊乱密切相关。我们 从细胞周期调控角度探讨了Gl期重要的调控分子在血液系统肿瘤细胞以及造血 干，祖细胞增殖、分化、凋亡中的作用。 论文第一部分，我们以六亚甲基二二乙酰胺(HMBA)体外处理HL．60、U937 细胞建立肿瘤细胞的增殖、分化、凋亡模型，研究Cyclin E、p27及 D、Cyclin 相关基因c—myc、Rb、Bcl．2在该细胞模型中的表达变化及其意义。结果表明， lb表达显著升高(如4mMHMBA HMBA干预HL一60、U937细胞72小时后，CDl 时细胞周期分析显示HL．60、U937细胞大量阻滞于Gl期。在所建立的这～细 胞增殖、分化、凋亡模型中，我们发现CyclinD、p27表达显著增高，呈剂量依 E表达为 E表达明显下调(如HL一60细胞4mM组Cyclin ±10．49％)；而Cyclin mRNA 胞模型中也发生显著的改变(如HMBA可使HL一60细胞c-myc、Bcl一2 表达均下调，而Rb mRNA表达则上调)。结果提示CyclinE、p27以及有关的相 E、 关基因可能参与了白血病细胞的增殖、分化、凋亡机制，因此设法下调Cyclin 上调p27就有可能为抑制肿瘤细胞的增殖和促使其分化、凋亡提供新的策略。从 细胞周期的角度探索细胞增殖、分化、凋亡的机制国内外文献鲜见报道。 在第二部分，我们以p27基因转染实验来进一步证实p27对肿瘤细胞增殖、 分化、凋亡的影响。成功地构建了p27基因真核表达载体pEGFP—C1／hp27，以此 细胞均可致明显的细胞生长增殖受抑；同时导致HL一60细胞CDIlb显著增加(如 72小时，pEGFP—C1／hp27转染致HL一60 复口人学医学博I学{t论文 瘤细胞的增殖，并显著促使其分化、凋亡，提示p27在细胞增殖、分化、凋亡中 的重要性，为可能的进一步应用p27基因进行血液系统肿瘤的基因治疗奠定基 础。未见文献报道。 论文第三部分实验中，我们以RNAi技术阻断了处于细胞周期进展核心地位 的CDK2基因的表达。将CDK2 间依赖性；CDK2SiRNA转染后，HL．60细胞生长增殖明显受抑；同时分化标记 调参与了肿瘤细胞增殖、分化的机制，这为从细胞周期角度干预肿瘤细胞增殖、 促使其分化继而达到抗肿瘤的目的提供又一新的途径。国内外未见文献报道。 论文第四部分，我们自行构建了p27 测序证实有完整的插入序列，表明构建成功。将此质粒以电击方式转染脐血 SiRNA mRNA表达显著下调，说明我们构建的p27SiRNA质粒有效；转染p27 Vs 同时保留CD34标记的阳性率也显著高于空质粒组(第6、9天分别为：84．5± 6．1％Vs 63．3±3．2％Vs 48．4±3．9％，p0．05、 28．7±5．4％，p0．05)。本部 SiRNA干扰方式可致脐血CD34+细胞明显扩增，而不影响其 分结果表明以p27 分化潜能，可为体外扩增脐血CD34+细胞丌辟崭新的途径，这不同于既往应用细 胞因子扩增CD34+细胞可造成细胞分化，对于提高CD34+造血干／祖细胞的移