β-catenin和突变体ΔN90腺病毒载体的构建及在MSCs中的表达.pdfVIP

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2016-11-15 发布于安徽
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β-catenin和突变体ΔN90腺病毒载体的构建及在MSCs中的表达.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2013年第11期 β-catenin 和突变体 ΔN90 腺病毒载体的构建及其在 MSCs 中的表达崔恒进王春燕胡君谢桂琴徐晓静张焕相（苏州大学基础医学与生物科学学院江苏省干细胞研究重点实验室，苏州 215123） Δ 摘要：旨在研究β-catenin 对MSCs 迁移的作用，构建β-catenin 和突变体 N90 的重组腺病毒载体，在MSCs 中验证其表达情况。将目的基因定向克隆到pAdTrack-CMV 穿梭载体上，并经Pme Ⅰ线性化后在BJ5183 细菌中与pAdEasy-1 骨架质粒同源重组，获得重组腺病毒载体，在QBI-293A 细胞中包装和扩增。结果显示，酶切和测序证实Ad-β-catenin 和Ad-ΔN90 质粒构建正确，荧光显微镜可观察到GFP 的表达，并选出150 MOI 为最适感染MSCs 的感染复数，Western blot 检测到Ad-β-catenin 和Ad-ΔN90 都能增加β-catenin 的蛋白表达量，TOPFlash 检测到Ad-β-catenin 和Ad-ΔN90 都能增加β-catenin 的转录活性。说明成功构建Ad-β-catenin 和Ad-ΔN90 腺病毒载体，并获得高滴度病毒子。关键词：腺病毒载体 β-catenin ΔN90 骨髓间充质干细胞构建 Construction of Adenovirus Vector Containing Rat β-catenin or ΔN90 Gene and Its Expression in MSCs Cui Hengjin Wang Chunyan Hu Jun Xie Guiqin Xu Xiaojing Zhang Huanxiang （，， Jiangsu Province Key Laboratory of Stem Cell Research School of Biology and Basic Medical Sciences ， 215123 ） Soochow University Suzhou Abstract: To construct the recombinant adenovirus vector containing β-catenin or ΔN90 gene for later research of the mechanism of β-catenin in MSCs migration. β-catenin or ΔN90 cDNA was inserted into a pAdTrack-CMV transfer vector, linearized with Pme Ⅰdigestion and pAdEasy-1 backbone vector was further cotransformed into the bacteria BJ5 183 competent cells for homologous recombination adenoviruse Ad-