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TNF-α对人脐静脉内皮细胞表达组织因子途径抑制物-2的影响及机制.pdf
汕头大学医学院硕士研究生论文
摘 要
背景
越来越多的证据表明炎症在冠心病 (coronary heart disease, CHD) 的发生、发展和预
后过程中起很重要的作用。多种炎症因子与冠心病的关系是冠心病研究领域的一个热
点,揭示炎症因子与冠心病的关系有重要临床意义。多种炎症因子(如 C 反应蛋白、肿
瘤坏死因子-α、白介素-6 等)在冠心病中都有不同程度的合成增加。肿瘤坏死因子-α
(tumor necrosis factor–α, TNF-α) 通过增加内皮细胞的促凝活性,促进由活化白细胞介导
的内皮细胞的病理损伤和功能改变,引起炎症及损伤;从而引起斑块的稳定性下降、斑
块破裂,导致急性冠脉综合征 (acute coronary syndrome, ACS) 的发生。血管内血栓形成
是很多疾病共同的病理过程,它涉及了凝血与抗凝系统、纤溶系统间的动态平衡。组织
因子途径在生理性止血与病理性血栓形成过程中具有极其重要的意义。组织因子途径抑
制物 (tissue factor pathway inhibitor, TFPI) 是体内的主要抗凝物质,分为组织因子途径
抑制物-1 (TFPI-1) 和组织因子途径抑制物-2 (TFPI-2) 。本试验即是探讨炎症因子TNF-α
对人脐静脉内皮细胞 (human umbilical vein endothelial cells, HUVEC) 表达组织因子途
径抑制物-2 的影响及其通路。
目的
观察 TNF-α (20ng/mL) 、ERK 抑制剂 PD98059 (10umol/L) 、NF-κB 抑制剂二硫代氨
基甲酸吡咯烷 (pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC) (50umol/L) 处理后,人脐静脉内皮细
胞 TFPI-2 表达的变化,探讨 TNF-α 对内皮细胞对 TFPI-2 的合成和表达的调节机制,进
而探讨其通路。
方法
(1)体外培养人脐静脉内皮细胞:人原代脐静脉内皮细胞 (HUVEC) 及低血清培
养基购自美国 Cascade Biologics 公司。细胞复苏后于 37℃、5%CO2 培养箱中静置培养,
经传代,冻存,所用细胞为 3-4 代。
II
汕头大学医学院硕士研究生论文
(2 )人脐静脉内皮细胞分为单纯培养基对照组、TNF-α组、PD 组、PDTC 组。 TFPI-2
蛋白测定采用 Western blot 法,TFPI-2 mRNA 测定采用 real time RT-PCR 法。
结果
(1)TNF-α可显著上调 TFPI-2 蛋白的含量 (P0.01) ,ERK 抑制剂 PD 、NF-κB 抑
制剂 PDTC 可使 TFPI-2 蛋白含量降低 (P0.05) 。
(2 )TNF-α可显著上调 TFPI-2 mRNA 的表达 (P0.01) ,ERK 抑制剂 PD 、NF-κB
抑制剂 PDTC 抑制 TFPI-2 mRNA 合成 (P0.05) 。
结论
(1)TNF-α可以明显上调 TFPI-2 的表达,对炎症刺激促进血栓形成有一定的保护
作用;
(2 )ERK 抑制剂 PD 及 NF-κB 抑制剂 PDTC 均抑制 TFPI-2 合成,证实 MAPK 信
号转导途径 (ERK) 及核转录因子 NF-κB 对 TFPI-2 的正向调节作用;
(3 )激活ERK 途径、激活核转录因子 NF-κB 可能是 TNF-α实现对 TFPI-2 的上调
作用的重要途径之一。
关键词:组织因子途径抑制物-2 ;肿瘤坏死因子-alpha; 核因子-kappaB
III
汕头大学医学院硕士研究生论文
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