中压色谱柱应用介绍要点解析.pptVIP

如果被分离化合物的溶解度很低，超载一般都是以增加 进样体积来实现的。这种超载进样称之为体积超载： 增加进样体积将导致峰变宽，并且渐渐趋近于矩形， 但是色谱峰依然保持对称。 当体积不断增大时，色谱峰会出现重叠甚至变形。 体积超载 当进样的样品质量超过一定量，样品在色谱柱的浓度会很高，以至色谱平衡被破坏。这种情况称为质量超载。质量超载的情况比体积超载要复杂的多。在质量超载情况下会出现三种效应： 散射效应样品在流动相的作用下会沿着柱子散布直至与固定相充分的接触达到平衡。这种现象会导致色谱带增宽。 填料的失活由于大量的样品进入色谱柱导致填料的活性基团被占据。从而改变了流动相的极性作用。其结果是保留时间减少。 非线性吸附等温线由于样品浓度高，色谱峰产生拖尾 质量超载 0.18 mg 16.9 mg 8.1 mg 填料容量 检测器 最常用的检测手段 在一至两个波长下给出化合物的相对吸光率 信号是基于比尔定律 A=eBC A=吸光率 e =分子在指定波长下的吸光率 B=光程长度 C=浓度 色谱信号取决于样品浓度及分子吸光率。 较为便宜 紫外检测器 近乎通用型检测手段 – 分析物的挥发性必须低于洗脱液 – 与分子吸光度及离子化无关 信号只取决于分析物的质量或浓度 没有定性数据，只有定量数据 可以使用梯度洗脱，但是需要分流 ELSD检测器 近乎通用型检测手段