OPN和乳腺癌细胞体外形成血管生成拟态关系研析.pdf

IHIfMllllllltIM删llftlllllflI 摘要 Y2157673 摘要 目的： 骨桥蛋白(Osteopontin，OPN)在人类乳腺癌细胞中高表达，并可能参与了某 些肿瘤细胞血管生成拟态(Vasculogenicmimicry，VM)的形成。在本项研究中， 我们调查OPN是否在乳腺癌细胞的VM形成中起作用，并探讨OPN和VM形 成相关蛋白MMP．9和VEGF之间是否有关联。 方法： 1、运用脂质体转染技术，将针对OPN编码基因的不同序列的重组质粒 MDA．MB．231中，WB检测挑选沉默效率最高的质粒进行后续实验。 行体外三维培养，24h后倒置显微镜下观察各组VM的数量，并通过PAS染色 证实VM的存在。 Blot技术测 3、三维培养24h后，提取各实验组细胞，用RT．PCR、Western 定OPN、MMP．9和VEGF的mRNA和蛋白质的表达量。 结果： 1中，荧光显微镜观察结果和WB实验结果显示，miR—opn2质粒 株MDA．MB．23 的沉默效率较其他组高，可进行后期实验。 转染试剂对照组、阴性质粒对照组的明显减少(PO．05)，正常组、转染试剂对 照组、阴性质粒对照组组间相比无显著性差异，说明OPN参与了MDA—MB一231 细胞株的VM形成。 mRNA和蛋白表达水平均比正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组 (miR．neg)明显下降(尸O．05)，正常组、转染试剂对照组、阴性质粒对照组 摘要 (miR．neg)组间相比无显著差异，提示OPN参与VM的形成很可能是通过影 响VM生成相关蛋白MMP．9和VEGF实现的。 结论： 1能够形成典型的PAS l、体外三维培养模型中人乳腺癌细胞株MDA．MB．23 染色阳性的VM现象。 2、靶向沉默OPN蛋白能够有效抑制体外三维培养模式中MDA．MB．231形 成VM的数量，提示OPN蛋白参与了VM的形成。 3、OPN参与VM的形成很可能是通过影响VM生成相关蛋白MMP．9和 VEGF实现的。 关键词：乳腺癌；骨桥蛋白；血管生成拟态 Abstract ABSTRACT Purpose： inhumanbreast is Osteopontin(OPN)isoverexpressed cancer,and likely associatedwiththeformationof insometumorcells．In vasculogenicmimicry(VMl OPN arolein in this whether theformationofVMbreast study,weinvestigated plays the betweenOPNandVM·-associated cancer,andexploredrelationship protein MMP．9andVEGF． Method： 1 cellswith MDA—MB-23 recombinan