核因子Y的C亚基(NF-YC)和大鼠脑缺血再灌注损伤关系研析.pdf

核因子Y 的C 亚基 （NF -YC ）与大鼠脑缺血再灌注损伤关系的研究 中文摘要 核因子Y 的C 亚基 （NF-YC ）与大鼠脑缺血再灌注 损伤关系的研究 中文摘要 目的：通过建立大鼠脑缺血再灌注模型，研究核因子Y(nuclear factor Y, NF-Y) 的C 亚基(NF-YC)在大鼠脑缺血再灌注损伤后发挥的作用，并进一步在细胞水平研究 NF-YC 在脑缺血再灌注后神经元凋亡中的作用机制。 方法：健康雄性S-D(Sprague-Dawley)大鼠，随机分成手术组、假手术组和正常 组。以线栓法建立大鼠右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO) 后再灌注模型，模拟脑缺血再灌注损伤。运用蛋白免疫印迹方法检测大鼠海马组织中 NF-YC ，细胞凋亡蛋白Bim(Bcl-2 interacting mediator of cell death, Bim)和半胱氨酸天 冬氨酸蛋白酶-3(cysteinyl aspartate specific proteinase 3, caspase-3)的表达，免疫组织化 学法验证NF-YC 的表达。运用免疫荧光方法分析它们在大鼠海马组织中的细胞定位 情况。末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP 缺口末端标记测定法(TdT-mediated dUTP nick-end labeling, TUNEL)检测缺血区海马CA1 区神经元细胞凋亡情况。然后，在神 经元细胞氧糖剥夺(oxygen and glucose deprivation, OGD)的细胞模型中，运用小干扰 RNA (small interfering RNA, siRNA)，干扰细胞内NF-YC 的表达，分别用免疫印迹的 方法和细胞计数试剂盒(cell counting kit, CCK-8)检测法研究NF-YC 在细胞凋亡中所 发挥的作用。 结果：我们发现大鼠在脑缺血再灌注之后会出现明显的神经功能缺陷，且持续时 间较长，无法完全恢复。蛋白免疫印迹及免疫组织化学染色实验均显示，手术组缺血 侧海马中NF-YC ，Bim，caspase-3 的表达变化是一致的，均呈先增加后降低的趋势。 免疫荧光双标法证实在海马CA1 区中，NF-YC 主要定位于神经元细胞核中，Bim 主 要定位于NF-YC 阳性细胞胞浆中。并且通过TUNEL 实验证实，缺血再灌注会导致 大鼠海马CA1 区神经元细胞凋亡数明显增加。同时，利用高分化的PC12 细胞建立体 外氧糖剥夺模型，其中，NF-YC 与Bim 蛋白的表达变化趋势一致；经CCK-8 测定， OGD 之后细胞活力明显下降。在运用NF-YC 的siRNA 敲低NF-YC 的表达后，细胞 I 中文摘要 核因子Y 的C 亚基 （NF -YC ）与大鼠脑缺血再灌注损伤关系的研究 活力则明显提高，NF-YC 的siRNA 起到细胞保护作用，说明NF-YC 在脑缺血再灌注 损伤后起到促进神经元凋亡的作用。 结论： 1、大鼠脑缺血再灌注后NF-YC 的表达变化与Bim 和caspase-3 的表达变化一致， 均呈先增加后降低的趋势，且共定位于神经元细胞中。 2 、在大鼠脑缺血再灌注后，NF-YC 的高表达可以通过Bim 的介导促进神经元细 胞凋亡。 关键词：核因子Y 的C 亚基 （NF-YC ），Bim，脑缺血再灌注损伤，神经元凋亡， 氧糖剥夺 作 者：王云锋 指导老师：崔 岗 核因子Y 的C 亚基 （NF -YC ）与大鼠脑缺血再灌注损伤关系的研究 英文摘要 The relationship between the subunit C of nuclear factor Y (NF-YC) and focal cerebral isch