抱茎独行菜种皮粘液质相关基因TTG1的克隆、表达分析及功能鉴定.pdfVIP

植物科学学报　 ２０１４ꎬ３２(４):３７１~３８２ Ｐｌａｎｔ ＳｃｉｅｎｃｅＪｏｕｒｎａｌ 　 　 ＤＯＩ: １０３７２４/ ＳＰＪ１１４２２０１４４０３７１ 抱茎独行菜种皮粘液质相关基因ＴＴＧ１的 克隆、 表达分析及功能鉴定 １∗ １∗ １ １ꎬ２ １ １ １∗∗ 曹婧 ꎬ 徐栋生 ꎬ 黄代红 ꎬ 袁军文 ꎬ 赵 娟 ꎬ 王文艳 ꎬ 兰海燕 (１. 新疆大学生命科学与技术学院ꎬ 新疆生物资源基因工程重点实验室ꎬ 乌鲁木齐 ８３００４６ꎻ ２.新疆生产建设兵团种子管理总站ꎬ 乌鲁木齐 ８３００１１) 摘　 要:抱茎独行菜(Ｌｅｐｉｄｉｕｍｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ Ｌ.)为十字花科具典型粘液质繁殖体植物ꎬ 而 ＴＴＧ１基因(Ｔｒａｎｓｐａ￣ ｒｅｎｔ ｔｅｓｔａ ｇｌａｂｒａ １)所编码的蛋白是调控种皮细胞分化并影响粘液质释放的转录因子ꎮ 目前关于 ＴＴＧ１基因在粘 液质繁殖体植物中的研究报道较少ꎬ 为探究 ＴＴＧ１基因在抱茎独行菜粘液质发育中的作用ꎬ 本研究利用同源克 隆技术获得抱茎独行菜 ＴＴＧ１基因ｃＤＮＡ 开放阅读框(ＯＲＦ)序列ꎬ 命名为 ＬｐＴＴＧ１ꎮ 序列分析表明ꎬ 该基因 ＯＲＦ全长为１０３２ ｂｐꎬ 编码３４３个氨基酸ꎬ 含有ＷＤ４０基序ꎻ ｑＲＴ￣ＰＣＲ分析结果显示ꎬ 该基因在抱茎独行菜各 组织中均有表达ꎬ 反映了该基因功能的多样性ꎻ 免疫组织化学定位结果表明ꎬ ＬｐＴＴＧ１在种子发育过程中内珠被 和外珠被的表达水平变化与外珠被粘液质的合成过程相一致ꎬ 推测该基因可能参与调控抱茎独行菜种皮的发育 及粘液质的形成ꎮ 将 ＬｐＴＴＧ１基因转化拟南芥ꎬ 该基因的过量表达显著促进了粘液质合成途径下游基因Ａｔ￣ ＭＵＭ４在角果中的表达ꎬ 表明该基因有可能参与粘液质合成途径调控ꎬ 并促进下游产物 ＭＵＭ４ 的产生ꎮ 然而ꎬ 对ＬｐＴＴＧ１转基因拟南芥与野生型植株表型的比较发现ꎬ 两者种子形态及粘液质分泌与释放方式均无显著差异ꎬ 这可能是因为抱茎独行菜种皮发育和粘液质形成是一个多基因调控的复杂过程ꎬ 某一基因的过量表达也许不会 引起明显的表型变化ꎮ 关键词:抱茎独行菜ꎻ 粘液质合成ꎻ 免疫组化ꎻ ＴＴＧ１基因ꎻ ｑＲＴ￣ＰＣＲ 中图分类号:Ｑ７８　 　 　 　 　 文献标识码:Ａ　 　 　 　 　 文章编号:２０９５￣０８３７(２０１４)０４￣０３７１￣１２ ＣｌｏｎｉｎｇꎬＣｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎꎬａｎｄ ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＡｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ Ｓｅｅｄ Ｃｏａｔ Ｍｕｃｉｌａｇｅ￣ｒｅｌａｔｅｄ Ｇｅｎｅ ＴＴＧ１ｆｒｏｍ Ｌｅｐｉｄｉｕｍｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍ １∗ １∗ １ １ꎬ２ ＣＡＯＪｉｎｇ ꎬＸＵ Ｄｏｎｇ￣Ｓｈｅｎｇ ꎬＨＵＡＮＧ Ｄａｉ￣Ｈｏｎｇ ꎬＹＵＡＮＪｕｎ￣Ｗｅｎ ꎬ １ １ １∗∗ ＺＨＡＯＪｕａｎ ꎬＷＡＮＧＷｅｎ￣Ｙａｎ ꎬＬＡＮ Ｈａｉ￣Ｙａｎ (１.Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｋｅｙ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｒｅｓｏｕｒｃｅｓ ａｎｄ Ｇｅｎｅｔｉｃ ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇꎬＣｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅａｎｄ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙꎬ Ｘｉｎｊｉａｎｇ ＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙꎬＵｒｕｍｑｉ８３００４６ꎻ２. ＳｅｅｄＡｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ Ｂｕｒｅａｕ ｏｆＸｉｎｊｉａｎｇ Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ａｎｄ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ ＣｏｒｐｓꎬＵｒｕｍｑｉ８３００１１) Ａｂｓｔｒａｃｔ:Ｌｅｐｉｄｉｕｍ ｐｅｒｆｏｌｉａｔｕｍꎬａｎ ａｎ