双重实时荧光PCR法检测食品和饲料中的鸡源性成分.pdf

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2012 1 双重实时荧光 PCR 法检测食品和饲料中的鸡源性成分 汪永信 安虹 程坚 程潇 刘娟娟 张波 （国家农副加工食品质量监督检验中心 安徽国家农业标准化与监测中心，合肥 230051） 摘 要 ： 根据鸡线粒体 DNA 细胞色素 b 基因序列和内参照基因 PUC18 质粒基因序列设计特异性引物和以不同荧光素标记的 TaqMan 探针。通过对反应条件的优化筛选，建立能同时扩增鸡源性成分和内参照基因成分的双重实时荧光 PCR 检测方法。设置 内参照反应是为了监控反应体系中是否含有PCR 反应的抑制物，避免出现假阴性结果。分别以鸡、鸭、鹅、火鸡、牛、羊、猪、鱼、兔、驴、 鹿、狗、马、鸽子、大豆、玉米、小麦、大米、马铃薯及番茄的线粒体 DNA 作为模板进行特异性试验，结果表明该方法仅能特异 性扩增鸡源性成分，而对其它物种未见有效扩增。通过灵敏度测试，该方法检出限达 0.01% 。所制定的方法特异性高，灵敏度好， 可以作为食品和饲料中鸡源性成分的高效检测方法。 关键词 ： 双重实时荧光 PCR 细胞色素 b 基因 鸡源性成分 内参照 检测方法 - Duplex Fluorescent Real time PCR Detection of Chicken Derived Materials in Food and Feed Wang Yongxin An Hong Cheng Jian Cheng Xiao Liu Juanjuan Zhang Bo - （National Agriculture Vice processing Food Quality Surveillance Test Center, Anhui Country Agriculture Standardization and Monitor Center, Hefei 230051 ） Abstract: We designed the specific primers and TaqMan probes targeting cytochrome b genes of chicken mitochondrial DNA and PUC 18 plasmid genes for the internal positive control （IPC）. We used different fluorescents to label the probes. After optimization of reaction - conditions, we set up a duplex fluorescent real time PCR method to detect chicken derived materials and IPC, simultaneously. In order to detect inhibition , IPC were used in all PCR reactions, which prevented false negative results. The specificity of the method was