裂谷热假病毒颗粒研制及其鉴定.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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裂谷热假病毒颗粒研制及其鉴定.pdf

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生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第期 2013 2 裂谷热假病毒颗粒研制及鉴定邓俊花林祥梅张永宁冯春燕王彩霞吴绍强（中国检验检疫科学研究院，北京 100029）摘要：裂谷热是危害严重的人畜共患病，为了给该病的分子生物学检测提供RNA 阳性质控品，制备了裂谷热假病毒颗粒并进行了检测和验证。将pGEM-T-RVF 质粒与假病毒载体p-MS2 质粒分别进行 I 和 d Ⅲ双酶切，然后连接构建p-MS2-RVF Pst Hin 重组质粒。将p-MS2-RVF 重组菌进行表达、酶消化及盐沉淀后纯化假病毒颗粒，在特性检测的基础上，借助荧光RT-PCR 方法进行鉴定。结果表明，裂谷热假病毒颗粒耐核酸酶，室温至少保持 1 个月，稳定，易运输；荧光RT-PCR 检测表明最低可达到4.25 ×102 copies 检测限。构建的裂谷热假病毒颗粒将为裂谷热分子生物学检测提供阳性质控物质。关键词：裂谷热假病毒颗粒鉴定 The Development and Identification of Rift Valley Fever - Virus like Particles Deng Junhua Lin Xiangmei Zhang Yongning Wang Caixia Feng Chunyan Wu Shaoqiang （， 100029 ） Chinese Academy of Inspection and Quarantine Beijing Abstract: It was to develop Rift valley fever （RVF ）virus-like particles （VLPs ）to effectively offer positive material for molecular biological detection. pGEM-T-RVFV plasmid and p-MS2 were individually digested with both Pst I and Hind Ⅲ , and then purified ligated to generate recombinant plasmid p-MS2-RVFV. The plasmid was cotransformed into E. coli. DH5α cell and induced with IPTG, incubated with RNase A and DNase I, and then subsided with salt to obtain the rough-wrought virus-like particles. The method of gradient centrifugation was used to prepared rarefied virus-like particles which was determined for characteristic property. The puried partic