毕赤酵母高效表达整合有CBD的米黑根毛霉脂肪酶.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2013 2 毕赤酵母高效表达整合有 CBD 的米黑根毛霉脂肪酶 薛冲冲  张俊辉  林影  韩双艳 （华南理工大学生物科学与工程学院，广州 510006） 摘 要 ： CBD 是一类存在各种水解酶 （木聚糖酶，纤维素酶等）中的能够结合并识别纤维素的结合域，能有效地增加酶在 底物周围的浓度，增强酶水解底物的能力。尝试将来源于哈茨木霉内切葡聚糖酶II （THEGII ）的CBD 及连接肽基因融合到S7-xyn 的N-末端区域中，以期能获得高酶活力的融合米黑根毛霉脂肪酶应用于工业生产，研究通过将融合基因克隆到pPICZαA 载体中， 构建分泌性表达质粒pPICZαA-CBD-RML ，载体经线性化后在毕赤酵母GS115 中融合表达。通过与没有融合CBD 的RML 比较，两 者具有相似的最适温度和温度稳定性曲线，而融合蛋白CBD-RML 的分泌量提高了17%。研究结果表明，来源于THEGII 的CBD 可以作为异源蛋白在毕赤酵母中表达的分泌增强子。 关键词 ： 毕赤酵母 米黑根毛霉脂肪酶 CBD 分泌表达 High Expression of Rhizomucor miehei Lipase in Pichia pastoris by Fusion to CBD Xue Chongchong Zhang Junhui Lin Ying Han Shuangyan （School of Bioscience and Bioengineering ，South China University of Technology ，Guangzhou 510006 ） Abstract:  Rhizomucor miehei lipase （RML ）, one of the important enzymes applied in industries, has a broad prospect of application. CBD, which is capable of tightly binding cellulose, has been found in diverse hydrolytic enzymes （cellulose, xylanase ）. The presence of a CBD is shown to increase the effective concentration of enzyme on substrates, thereby assisting the enhancement of hydrolytic enzyme activity. Here the CBD from Trichoderma harzianum endoglucanase II （THEGII ）was connected to the N-terminal of RML through an endogenous linker peptide. Then the fusion genes were cloned into the secreted expression vector pPICZαA to construct recombinant plasmid pPICZαA-CBD-RML. The plasmid was linearized and transformed into Pichia pastoris GS115 to obtain Pichia pastori