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生物技术通报
年第 期
·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 2008 3
人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达
周利苹 张莲芬 雷楗勇 张文婷 蔡燕飞 金坚
(江南大学医药学院分子药理研究室 江南大学工业生物技术教育部重点实验室,无锡 )
214122
摘 要: 目的 构建重组表达人血清白蛋白( ) 肽( )融合蛋白的毕赤酵母表达菌株。方法 根据表达系
HSA-C CP
统的密码子偏好性优化 基因,酶切连接 质粒( )和 ( )基因,将 融合基因双酶
CP pBlue-HSA HSA1800bp CP100bp HSA-CP
切后插入分泌表达载体 中,重组质粒 经 线性化后,电击转化毕赤酵母 ,表型筛选
pPIC9K pPIC9K-HSA-CP SalⅠ GS115
+转化子。 鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达。结果 融合基因约为 ,序列测定正确。 分析表
Mut PCR 1900bp SDS
明表达融合蛋白的相对分子量约为 ,摇瓶培养表达量为 , 鉴定显示表达的融合蛋白为 和
70kD 140mg/LWesternblot HSA
CP的杂合分子。结论 实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人
胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用。
关键词: 肽 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母
C
SecretoryExpressionoftheFusionProteinHSA-CPin
PichiaPastoris
ZhouLiping ZhangLianfen LeiJianyong ZhangWenting CaiYanfeiJinJian
( , ,
LaboratoryofMolecularPharmacologySchoolofMedicineandPharmaceuticsTheKeyLaboratoryofIndustrial
, , , )
BiotechnologyMinistryofEducationJiangnanUniversityWuxi214122
: : ,
A
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