锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及其重组抗体的三维模建.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN 年第 期 2012 1 锌螯合物抗体可变区的克隆鉴定、真核表达及 重组抗体的三维模建 1,2 1 2 2 2,3 李鹏 刘凤权 杨慧 赵丽 李霞 1 2 （南京农业大学植物保护学院，南京 210095 ；北京市农林科学院蔬菜研究中心，北京 100097 ； 3北京农产品质量检测与农田环境监测技术研究中心，北京 100097） - - 摘 要 ： 筛选得到能分泌抗锌（II ） 二乙烯三胺五乙酸（Zn （II ） DTPA ）的单克隆抗体杂交瘤细胞株2E8E3 。经测定，此 株细胞分泌 IgM ，轻链 κ型抗体。为了得到该抗体可变区序列，分别在小鼠抗体的信号肽区域和抗体的第一恒定区半胱氨酸残基（Cys ） - - 附近选择合适引物，通过 RT PCR 方法，得到重（VH ）、轻（VL ）链可变区序列。将序列进行BLAST 分析、SignalP 分析、IMGT V/ QUEST 分析，结果显示，克隆到的 V -2E8E3 （465 bp ）和V -2E8E3 （417 bp ），序列与小鼠 μ重链，κ轻链抗体可变区序列具有同 H L 源性（相似度 97% ），前端序列符合信号肽特征，抗体骨架区（Framework region ，FR ）及第一恒定区均含有保守半胱氨酸（Cys ） 残基。在此基础上，构建了重组抗体的真核表达载体，转染 293T 细胞并用间接 ELISA 法初步验证其具有表达活性。对重组抗体进 行了三维模拟，并推测了主要氨基酸残基。试验结果表明，克隆到了正确的 2E8E3 抗体可变区序列并初步鉴定为有活性。 关键词 ： 重金属 单克隆抗体 免疫学检测 序列分析 三维模拟 Cloning, Identification and Eukaryotic Expression of Variable Region of Monoclonal Antibodies Against Chelated Zinc and Three Dimensional Modeling of Recombinant Antibody