临床等级质粒DNA的实验室制备.pdfVIP

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2016-05-13 发布于安徽
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临床等级质粒DNA的实验室制备.pdf

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生物技术通报 BIO TE CHN OLOG Y B ULLETIN 2009 5 DNA 皮文辉宋志强刘守仁 (, 832000) : 在实验室有效获得 100 m g 临床试验等级的质粒 DNA摇床发酵 3 个批次, 批次 4 L培养液, 产生大约 160 g 的细菌沉淀物碱裂解菌体, 气浮法结合离心分离浮杂沉淀裂解液经 045/022 m 囊式过滤器过滤然后采用阴离子色谱介质富集质粒, 异丙醇沉淀重新溶解沉淀后采用 100 kD 切向流超滤处理, 获得 100 m g 临床试验等级质粒 DNA体外体内转染试验对质粒表达效果进行了鉴定结果表明, 纯化的质粒 DNA 几乎检测不到内毒素RNA 和蛋白质, A260 /A280比值在 182~ 186范围内纯化的质粒 DNA 能够满足动物临床试验 : 临床等级质粒 DNA 色谱制备质量控制 DevelopmentofPilotscaleProductionProcess for ClinicalgradePlasmidDNA P iW enhui S ng Zhiq iang Liu Sh uren (TheBreed BiotechnologyK ey Laboratory of Sheep in Group X injiang, Shihezi 832000) Abstract: In rder t facilitate the pr ducti n f ~ 100 mg clin icalgrade plasm id DNA in an academ ic lab rat ry envir nm ent, ab ut 160 g bacterial pastewas y ielded thr ugh ferm entati nThe b i m ass w as alkalinelysed, and the fl ccu lent precip itatew as separa ted by air fl atati n, f ll wed by cen trifugati nAfter rey pr cedures, including depthfiltrati n, d wnstream pr cessing, extracti n tan gential fl w filtrati n (TFF), final pr duct f 100 m g plasm id DNA w as b tainedThe pr duct w as b i l gically active up n in vitro and in vivo transfecti nBesides, the p lasm id DNA was pr ved as undetectable r extrem ely l w residual end t x in, RNA, pr tein, and the A260 /A280 rati between 182 t 186Theref re, th is pr cess f r plasm id purificati n can be adapted f r anmi al clin ical trials K ey w ords: C lin icalgrade plasm id DNA Chr m at graphy preparati n Quality c ntr l [ 1] , , pM GHRH pEGFPN1 100 mgDNA, 112 Fract gel EMD TMAE (M )M erck(); T rit n X100 , DNA (