尿毒症患者桡动脉钙化和AKP、BGP、OPN表达的关系.pdf

摘要 尿毒症患者桡动脉钙化与AKP、BGP、OPN表达的关系 硕士研究生王鑫 导 师刘章锁教授 郑州大学第一附属医院 肾内科 郑州450052 中文摘要 背景 心血管疾病是慢性肾脏病患者致死的主要原因，，几乎占ESRD病人总死亡 人数的50％t11。大约20％归因于冠状动脉疾病。动脉钙化尤其是冠状动脉钙化是 心血管疾病风险因素之一，而深入研究表明．心血管钙化是关于ESRD患者全因 死亡和心血管死亡的一个独立预测因子【2’3】。 血管钙化主要包括两种类型，内膜钙化和中膜钙化，前者是一种弥漫性动 脉粥样硬化，后者呈局限性分布，和动脉粥样硬化风险因素无关，常见于年轻血液 透析患者。中膜钙化发生在动脉中层，主要累及内弹力膜，整条动脉受累，中 膜钙化是CI①患者血管钙化的特点。 血管中膜钙化，引起血管中膜厚度增加，动脉僵硬，顺应性降低，收缩压 升高，舒张压降低，脉压增大。脉波速度增快。动脉扩张受损，后负荷加重， 左心室肥厚，影响冠状动脉灌注。既往认为血管钙化仅仅是钙磷失衡所致的钙 盐沉积于细胞和组织间的被动过程【4】，近年来认为血管钙化是类似于骨和软骨 形成的主动的调节过程。血管平滑肌细胞表达成骨细胞表型是血管钙化过程的 中心环节【51。CKD患者血管钙化的调节机制比较复杂，目前尚未阐明。可能与 成骨样细胞产生的胶原和非胶原的基质蛋白有关，后者包括各种蛋白如骨桥蛋 白、碱性磷酸酶、骨钙素、骨形成蛋白(BMP2)及基质Gla蛋白质等【6，‘丌。 摘要 目的 本研究共分为两个部分，第一部分研究桡动脉内瘘术患者血管钙化情况； 第二部分研究不同程度血管钙化患者碱性磷酸酶(AKP)、骨钙素(BGP)、骨 桥蛋白(OPN)的蛋白及基因的表达情况，并了解三种蛋白的表达情况与动脉 中膜钙化的关系。 材料与方法 1标本来源 血管标本取1刍2010年11月至2011年9月间在郑州大学第一附属医院住院的尿 毒症患者进行动静脉内瘘手术切除的桡动脉标本共47例。标本取得后分为两份 一份用过碘酸盐．赖氨酸．多聚甲醛固定，另一部分保存至液氮中冻存备RNA提取 使用。 2HE染色、茜素红染色 苏木精．伊红染色(HE染色)，观察血管结构，分析血管内膜、中膜、外膜 的基本层次，以及是否存在其他血管病变，钙盐颗粒呈深蓝色。茜素红染色， 钙化部分会呈现清晰的橘红色，观察血管钙化程度，根据血管钙化的严重程度 分为三组，分别是无钙化组、轻中度钙化组、重度钙化组。 3免疫组化检测 免疫组化检测观察AKP、BGP、OPN在钙化区域的表达，并分析其蛋白表达 在不同的钙化程度血管中的分布。 4实时荧光定量PCR检测 利用组织RNA提取试剂盒提取组织的总RNA，反转录制备成eDNA后，采用 在不同程度钙化血管组织中的表达水平； 硅甲 =口7K 1．钙化程度较高标本比无钙化标本血管中膜明显增厚，呈现出密集弥漫性 钙沉积点。根据定性资料的spearman相关分析，血管钙化的程度与患者的年龄、 II 摘要 透析时间、钙磷乘积及全段甲状旁腺激素水平成正相关(r均0，P0．05)，有 糖尿病的患者血管钙化的程度较无糖尿病的患者高(闻．484，P0．01)，有颈 动脉斑块的患者血管钙化程度较无颈动脉斑块的患者高(r=o．605，P0．01)。 性别、有无高血压病史、血钙、血磷水平与血管钙化程度无明显相关性(尸O．05)。 2．免疫组化检测观察到AKP、BGP、OPN在钙化区域即动脉中膜中的蛋白 表达水平。血管无钙化组、血管轻中度钙化组以及血管重度钙化组之间两两比 较蛋白表达水平差异均有统计学意义(P均O．05)，并且血管重度钙化组的蛋白 表达水平比血管轻中度钙化组的蛋白表达水平高，血管轻中度钙化组的蛋白表 达水平比血管无钙化组的蛋白表达水平高。 3．实时荧光定量PCR(Real-timePCR)的方法检测了标本中AKP、BGP、 OPN的mRNA表达水平。血管无钙化组、血管轻中