洋桔梗的转基因的研究.pdfVIP

生物技术通报 BIO TE CHN OLOG Y B ULLETIN 20 10 3 陈奇 王阁奇 马莉 陈丽梅 ( , 650224) : 以叶盘为外植体, 通过农杆菌菌株 C5 8C l( pPM P90) 介导, 开展了用植物表达载体 pK 235SGFP ( G FP 基因) 转化洋桔梗( E ustoma russellianum ) 的研究洋桔梗叶盘用农杆菌浸染 15 - 20 m in, 在共培养基上与农杆菌共培养 2 d后, 转移 到分化培养基上诱导愈伤组织10 d后选取部分叶盘在紫外灯下观察 GFP 的荧光亮点, 结果 80% 以上的叶盘都有 GFP 的荧 光亮点, 说明农杆菌对叶盘的感染效率很高在分化培养基上红花洋桔梗叶盘不定芽分化频率约为 30% , 把分化培养基上形 成的小苗转移到 有 Km ( 20 mg /L ) 的生根培养基上, 进行生根诱导筛选具有 Km 抗性的转基因植株, 统计结果说明红花洋桔 梗的转化效率为 2 4% 随机选取 4株具有 Km 抗性的洋桔梗植株进行 PCR 检测, 结果均为阳性, 证明 GFP 基因已整合到洋 桔梗基因组中, 选取经 PCR 检测为阳性的植株叶片, 用激光共聚焦显微镜观察, 结果发现有 GFP 的绿色荧光出现在叶片细胞 质中, 说明叶片中有 GFP 蛋白的表达, 转化试验成功 : 洋桔梗 农杆菌介导 转基因 G FP 基因 Study of T ransform ation Eustoma russellianum Ch en Q i W ang G eq i M a L i Chen L mi ei (B iotechno logy R esearch Cen ter, K unm ing Un iv ersity of S cience and T echnology, K unm ing 650224) A bstrac:t T ran sfo rm a tion study w as condu cted in L isianthu s, E ustom a russellianum, w ith a plant expression vector pK 235SGFP ( conta ining GFP gene) byAg robacteriumm ediated m ethod u sing leaf discs as the explants T heE ustoma russellianum leaf discs w ere in cub ated w ith theA g robacter ium fo r 15 - 20 m in A fter cocultured w ith theA g robacterium for 2 days, the leaf discs w ere transferred to ca llusindu ced m edium T en days late r, a p art of the lea f discs w ere se lec ted and subjected to GFP spot ob servation under a UVlam p T he resu lts show ed th at 80% o f the selected lea f d iscs displayed G FP spots, indicating h igh infection effic iency of the leaf discs by the A g robacterium T he eff iciency o f the adventitious bud indu ction w