大学学位论文高温菌的分离纯化与分子鉴定.docVIP

2015届本科毕业论文（设计） 高温菌的分离纯化与分子鉴定 姓 名： 赵影 院 别： 生命科学学院 专 业： 生物工程 学 号： 110913038 指导教师： 刘秀花 2015年4月6日 目 录 摘要 1 关键词 2 1 材料与方法 3 1.1实验材料 3 1.1.1实验对象 3 1.1.2实验试剂 3 1.1.3 实验仪器 4 1.1.4培养基 4 1.2 细菌的分离纯化 4 1.3菌落形态与革兰氏染色特征观察 4 1.4菌株的分子鉴定 4 1.4.1细菌DNA 的提取 4 1.4.2 16SrRNA基因扩增 5 1.4.3 16SrRNA基因扩增产物的序列测定 5 1.4.4 DNA序列分析 6 1.5 产耐热β-半乳糖苷酶的验证实验 6 2 ：结果及分析 6 2.1 菌体菌落形态及染色特征 7 2.2 分子鉴定结果 7 2.2.1 16SrRNA的扩增 7 2.2.2 16SrRNA的测序结果 8 2.2.3 DNA序列分析 8 2.2.4嗜热脂肪芽胞杆菌的验证实验 10 3 讨论 10 3.1 细菌菌株的鉴定 10 3.2细菌菌株的验证 10 3．3高温菌的研究意义 10 4 结论 11 5 参考文献 11 6 致谢 12 高温菌的分离纯化与分子鉴定 赵影 指导老师：梁峰 （商丘师范学院生命科学学院，河南 商丘 476000） 摘 要：为了能够更好的充分开发利用高温嗜热菌资源，获得一些耐高温的酶类。本实验以采自不同地方的温泉中的污泥为原料，在培养基（DSM88固体培养基，温度70度，PH7.0）中，运用涂布，四区划线的方法，分离纯化原料中的微生物并进行革兰氏染色，并对其16SrRNA的基因进行序列测定和系统分析，结果发现该菌为革兰氏阳性菌，且产芽孢，与典型的嗜热脂肪芽胞杆菌属的菌种有最高同源性；为进一步验证分析结果对其生理生化又做了研究，最后发现该菌在以乳糖为唯一碳源，x-gal作为显色剂的培养基中能够产生蓝色的菌落，这充分说明该菌株能够产生耐高温的β-半乳糖苷酶即确定该菌就是嗜热脂肪芽胞杆菌。 关键词：嗜热脂肪芽胞杆菌；16SrRNA；耐高温的β-半乳糖苷酶；进化分析； Purification and molecular identification of thermophilic bacteria Zhao ying Supervisor: Liang Feng （Department of Life Science, Shangqiu Normal University, Shangqiu 476000, China) Abstract:In order to take full advantage of high temperature thermophiles resources, so []that we can access to some of the high-temperature enzymes. In this experiment, spa collected from different parts of the sludge as raw material. we used a coating method, four dividing line in the culture medium (DSM88 solid medium, a temperature of 70 degrees, PH7.0) and the separation and purification of the raw material and microorganisms Gram stain, and 16SrRNA sequencing and analysis system of its gene, It was found that the strain of Gram-positive bacteria and spore-forming, with the typical Bacillus stearothermophilus Genus species has highest homologyo; To further verify the analysis results, We further make the physiological and biochemical experiments.Finally, the bacteria found in lactose as the sole carbon source, x-gal as c