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体外单倍体诱导与单倍体育种 主要内容：单倍体的体外诱导方法和单倍体育种技术； 重点：花药和花粉的培养方法 难点：小孢子母细胞的发育过程； 体外单倍体诱导 利用离体培养花药或小孢子来诱导形成单倍体植株。 花粉植株的形态发生方式 （1）愈伤组织型 花粉粒→愈伤组织→单倍体植株 （2）胚状体型 花粉粒→胚状体→单倍体植株 （3）混合型 花粉粒→愈伤组织→单倍体植株 花粉粒→胚状体→单倍体植株 单倍体育种(haploid breeding) 单倍体植物，经过人工染色体加倍，形成纯和二倍体，从二倍体中筛选优良个体，繁育成新品种；或者利用优良的纯和二倍体作为杂交育种的原始材料。 单倍体育种的优点 便于控制杂种分离，缩短育种周期； 利于排除显隐性基因干扰，提高选择效率； 利于加快自交系选育； （通过多代自花授粉或多代近交后所得到的纯系） 易于作为诱变育种的材料； （用物理、化学因素诱导动植物的遗传特性发生变异，再从变异群体中选择符合人们某种要求的单株/个体，进而培育成新的品种或种质的育种方法 ） 主要内容 13.1 植物小孢子的发育 13.2 花药和花粉培养 13.3 花药和花粉培养方法 13.4 单倍体育种在生产实践中的应用 13.1 植物小孢子的发育 小孢子发育过程： 高等植物初生造孢细胞多次有丝分裂 →小孢子母细胞(体积大、核大、质浓、无液泡) →减数分裂开始，纤维素初生壁溶解，形成胼胝质壁 →连续两次分裂，DNA量由4c下降为1c，染色体数由2n变成n。 小孢子母细胞发育到成熟的花粉粒的过程 分为三个时期 第1期，小孢子母细形成四分体（四分体期） 小孢子母细胞减数分裂→厚的胼胝质包裹的小孢子四分体→胼胝质分解,四个小孢子分离。 第2期、分离的单个小孢子发育(单核期) 单核早期、中期 起初为薄壁球形小孢子，细胞核大而圆居细胞中央； 单核晚期(单核靠边期)：细胞质出现液泡，并逐渐变大，细胞核被挤到一边，细胞变为纺锤形。 A型花粉粒，第2期末，细胞明显增大，花粉细胞第1次有丝分裂(不均等分裂) 。小孢子细胞壁外表不断沉积孢子花粉素，构成坚韧外壁，外壁内是纤维素构成的内壁。 第3期，小孢子发育为花粉粒(双核期或三核期) 第3期，进入标志为小孢子细胞中出现明显双核。 核于近壁处分裂，近壁的核小为生殖细胞核(配子体)；中央核为营养细胞核。 到一定阶段，生殖细胞进入营养细胞细胞质，营养细胞的液泡分散消失。不同时期，生殖核第2次有丝分裂为两个雄配子，可成为成熟的两细胞花粉和三细胞花粉。 资料 约有70%的被子植物当花粉成熟时只有营养细胞和生殖细胞，如棉、桃、梨、柑橘、茶、大葱、大豆、百合等，此时称为二核期花粉粒。 另外一些植物的花粉在散出之前，其生殖细胞再进行一次有丝分裂，产生2个精细胞，它们是以含有1个营养细胞和2个精细胞进行传粉的，被称为三核期花粉粒，如玉米、水稻、油菜、小麦、向日葵等。二核期花粉粒和三核期花粉粒通常又被称为雄配子体，精子则称为雄配子。 13.2 花药和花粉培养 13.2.1 花药培养 13.2.2 花粉培养 13.2.3 小孢子母细胞培养 花药培养 anther culture，将成熟或未成熟的花药从母体植株上取下，放在无菌的条件下，使其进一步生长、发育成单倍体细胞或植株的技术。 13.2.1 花药培养 花药培养的优缺点： 优点：不需要游离花粉处理，比花粉培养方便快捷。为单倍体培养的主要手段。 缺点：需要对后代进一步筛选。因为可能得到花药体细胞来源的二倍体植株。 花药培养基常用类型： 琼脂固体培养， 液体培养， 固液双层培养。 获得花药再生单倍体植株的两种方式 器官再生：花粉先形成愈伤组织，分化形成植株；如小麦，水稻等。 胚状体再生：花粉先形成胚状体，发育成植株。如烟草等。 胚状体发生途径优点：数量多、速度快、结构完整、再生率高等。 胚状体再生的两个特点： ①两极性，胚状体发生起初，即具有根端和芽端； ②具有完整植株的特点，与外植体维管束无直接联系。 13.2.2 花粉培养 花粉培养(pollen culture)：指把花粉从花药中分离出来，以单个花粉粒作为外植体进行离体培养的技术。 1，裸子植物的