第二章2电压钳制和膜片钳制技术2012.9.25.要点.ppt

离子通道等效电路 贴附式记录（ Cell-attached recording） 内面向外记录（Inside-out recording） 外面向外记录（Outside-out recording） 全细胞记录（Whole-cell recording） 五．膜片钳技术在中医学方面的应用 对中医药研究而言，现阶段使用膜片钳技术，主要用于观察中药对离子通道特性的影响来探讨药物在细胞与分子水平的作用机制，进而来探讨其防治心律失常、强心以及对抗高血压、脑血管痉挛等的作用机制，或者发现其引起心律失常等临床疾病的离子通道机制。如人参，粉防己碱，丹参，三七皂甙，黄芪，川芎等。 六．膜片钳技术在细胞分泌活动中的应用 细胞膜的磷脂双分子层结构具有电容的性质，其电容大小与膜面积成正比，因此可以通过测量膜电容来反映膜面积。由于递质分泌时突触小泡与突触前膜融合，使细胞膜面积增加，因此可以通过监测膜电容的变化来研究递质的分泌。细胞膜电容检测技术能够分辨单个囊泡与细胞膜融合引起的膜电容变化。对囊泡融合的时间分辨率达毫秒级。由于胞吐后囊泡膜的回收会导致膜电容的减少，因此采用毫秒事件分辨率的膜电容检测技术能提供囊泡膜从融合到回收整个过程的详细信息。近十年来，全膜电容检测技术在研究细胞胞吐和胞吞机制方面得到了越来越广泛的应用，取得了丰硕的研究成果。如W?lfel等（2003年）联合应用全细胞膜电容检测技术和Ca2+解笼锁（Ca2+ uncaging）技术对中枢谷氨酸能神经元递质胞吐动力学和囊泡库清空对Ca2+的敏感性的研究。 七、膜片钳技术在昆虫毒理学方面的应用 南开大学贺秉军等应用膜片钳技术分析了光学活性除虫剂菊酯对棉铃虫神经细胞钠离子通道影响，探讨了“用膜片钳技术筛选光学活性杀虫剂”，明确了用膜片钳技术分析杀虫剂生物活性时应检测的电生理参数，建立了用膜片钳技术筛选杀虫剂的基本方法，成功地将膜片钳技术引入到杀虫剂筛选研究领域，对光学活性农药的开发应用和机性害虫的治理将有所裨益。 八．膜片钳技术在植物学研究方面的应用 1. 用膜片钳技术研究植物细胞质膜的离子通道 钾是植物生长发育所必须的矿质营养元素之一，钾离子广泛分布于植物各组织器官中，是植物体内含量最丰富的一价阳离子。钾元素在植物生长过程中起着非常重要的作用，它参与植物生长发育中许多重要的生理生化过程。 植物吸收K+涉及到质膜上的钾转运蛋白，钾转运蛋白分为两类：K+通道和高亲和K+转运体，其中K+通道是主要的K+吸收途径。有研究报道，烟叶K+不仅参与烟叶生理生化反应和提高烟株抗逆性，还对烟草的可燃性有明显作用，与烟叶香味及卷烟制品安全性有密切关系；围绕烟草的K+吸收机制，采用膜片钳技术研究烟草的K+通道的调控及其机制，对于提高烟叶的含钾量，改良烟草产量和品质具有重要意义。 近年来，也有学者应用膜片钳技术和平面脂质双分子层技术研究植物细胞质膜上Na+ 转运相关的离子通道。探讨Na+吸收和转运机制，阐明作物抗盐机制, 增加高产作物的抗盐性，有助于人们理解植物体内的Na+稳态, 并进而通过减少Na+进入植物体内以控制其毒害效应，促进农业生产。 2. 用膜片钳技术研究高等植物液泡离子通道 液泡是成熟植物细胞和许多真菌、藻类(原核细胞除外) 的重要组成部分。中央大液泡是植物的贮存库,占细胞总体积的90%以上。膜片钳研究表明,许多离子和代谢物通过离子通道和离子泵跨液泡膜运送。液泡膜上重要的离子通道有两种：SV通道和FV通道。SV通道是液泡膜上普遍存在的一种阳离子选择性通道。其激活受许多因素的调控, 包括胞质钙、胞质pH、液泡内钙、钙调素等。 张朝峰等采用膜片钳技术研究了镁离子对萝卜液泡膜SV通道的影响，结果表明MgCl2在萝卜液泡膜内外两侧对SV通道的影响是不相同的, 液泡外液中的Mg2+对SV通道具有抑制作用, 而电极内液中的Mg2+对SV通道无影响,提示胞质镁可能发挥更大的生理功能, 这为进一步研究Mg2+对离子通道的调控以及对植物生理活动的影响提供了重要依据。离子通道在植物生长发育以及细胞感受外界环境的刺激过程中起着非常重要的作用, Mg2+有可能通过影响通道电流而影响信号转导, 进而对植物的生长发育产生直接或间接的影响。 九．膜片钳技术在海洋鱼类研究中的应用 分析的内容 1、宏观电流的分析 宏观电流（macroscopical current）是指膜上许多通道同时开放形成的离子电流，是由许多单通道电流总和形成的。应用电压钳技术在单细胞或多细胞标本上记录的电流和膜片钳全细胞模式记录的电流都属宏观电流。 （1）、通道的药理学特性 通道的药理学特