1.2DNA重组技术的基本操作程序.docVIP

1．2 基因工程的基本操作程序 【学习目标】 1．简述基因工程原理及基本操作程序。 2．尝试设计某一转基因生物的研制过程。 【教学重点】 基因工程基本操作程序的四个步骤。 【教学难点】 1．从基因文库中获取目的基因。 2．利用PCR技术扩增目的基因。 【预习导学】 一、目的基因的获取： 1．目的基因：符合人们需要的，编码蛋白质的 。 2．获取目的基因的方法 (1)从基因文库中获取目的基因 ①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多 ，导人受体菌的群体中 ，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因组文库：含有一种生物的 基因 ②种类 cDNA文库：含有一种生物的 基因 ③目的基因的获取 根据基因的有关信息：基因的 序列、基因在 上的位置、基因的 产物mRNA、基因的 产物蛋白质等特性获取目的基因。 (2)利用PCR技术扩增目的基因 ①PCR：是一项在生物体外 特定DNA片段的核酸合成技术。 ②条件：已知目的基因的 序列。 ③过程：目的基因DNA受热形成 ，与 结合，然后在 ____的作用下进行延伸形成DNA。 ④方式：指数扩增=2n(n为扩增循环的次数) (3)人工合成法：基因较小，核苷酸序列已知，可以人工合成。 【例题巩固】 ( )例1．下列获取目的基因的方法中需要模板链的是 ①从基因文库中获取目的基因 ②利用PCR技术扩增目的基因 ③反转录法 ④通过DNA合成仪利用化学方法人工合成 A．①②③④ B．①②③ C．②③④ D．②③ ( )例2．（2011年江苏卷）请回答基因工程方面的有关问题： (1)利用PCR技术扩增目的基因，其原理与细胞内DNA复制类似（如下图所示）。 图中引物为单链DNA片段，它是子链合成延伸的基础。 ①从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物A的DNA片段所占的比例为 。 ②在第 轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的DNA片段。 (2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。 ①第1组： ； ②第2组： 。 (3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的功能，这是因为 。 (4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb 即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。 二、基因表达载体的构建 1．表达载体的组成：目的基因+ + +标记基因等。 2．启动子：位于基因的 ，它是 和结合的部位，驱动基因转录产生mRNA。 3．终止子：位于基因的 ，终止 。 4．标记基因： 受体细胞是否含有目的基因。 5．表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且 给下一代；同时使目的基因 ____ 和发挥作用。 6．不同的受体细胞及目的基因导入受体细胞的方法不同，基因表达载体的构建上也会有所差别。 ( )例3．科学家在培育抗虫棉时，经过了许多复杂的过程和不懈的努力，才获得成功。起初把苏云金芽孢杆菌的抗虫基因插入载体质粒中，然后导入棉花的受精卵中，结果抗虫基因在棉花体内没有表达。然后在插入抗虫基因的质粒中插入启动子(抗虫基因首端)，导人棉花受精卵，长成的棉花植株还是没有抗虫能力。科学家又在有启动子、抗虫基因的质粒中插入终止子(抗虫基因末端)，导入棉花受精卵，结果成长的植株，有了抗虫能力。由以上过程推知，作为目的基因的运载体应具备的结构是 A．目的基因、启动子 B．目的基因、终止子 C．目的基因、启动子、终止子 D．目的基因、启动子、终止子、标记基因 三、将目的基因导入受体细胞 (一)转化：目的基因进人受体细胞内，并在受体细胞内维持稳定和 的过程。 (二)方法 1．将目的基因导入植物细胞 (1)农杆菌转化法 ①农杆菌特点：易感染 植物和裸子植物，对___________植物没有感染力；Ti质粒的 可转移至受体细胞，并整合到受体细胞的染色体上。 ②转化：目的基因插人 农杆菌→导入植物细胞→目的基因整合到植物细胞染色体上→目的基因的遗传特性得以稳定维持和表达。 (2)基因枪法 基因枪法：是单子叶植物中常用的一种基因转化方法，但是成本较高。 (3)花粉管通道法 花粉管通道法：这是我国科学家独创的一种方法，是一种十分简便经济的方法。（我