人HAS3基因核心启动子区域初步鉴定分析.pdfVIP

第３４卷第５期 第　三　军　医　大　学　学　报 Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．５ ２０１２年３月１５日　　　　　　　　　　 Ｊ　Ｔｈｉｒｄ　Ｍｉｌ　Ｍｅｄ　Ｕｎｉｖ 　　　　　　　　　　Ｍａｒ．１５　２０１２ ３９１ 文章编号：１０００５４０４（２０１２）０５０３９１０５ 论著 人ＨＡＳ３基因核心启动子区域的初步鉴定与分析 １，２ １，２ １，２ ３ １，２ １，２ １，２ １，２ １，２ 吉　颖 ，刘　竹 ，艾　青 ，朱　江 ，谢宇 ，翁华莉 ，刘革力 ，宋方洲 ，卜友泉 　　（４０００１６重庆，重 １ ２ ３ 庆医科大学：生物化学与分子生物学教研室 ，分子医学与肿瘤研究中心 ，附属第一医院耳鼻喉科 ） 　　［摘要］　目的　对人ＨＡＳ３基因的核心启动子区域进行初步鉴定和分析，为深入研究ＨＡＳ３基因的转录调控奠定基 础。方法　以前期构建的人ＨＡＳ３基因启动子荧光素酶报告基因重组体Ｐ（－７６１／－３０５）为模板，采用ＰＣＲ介导的基因定 点突变技术构建４个不同的系列删除体，并对ＨＡＳ３启动子区域中的Ｓｐ１结合位点和核心启动子元件进行定点突变，构建相 应的定点突变重组体；采用荧光素酶双报告基因分析技术检测各重组体的启动子活性。结果 　 构建了Ｐ（－７６１／－５６９）、 Ｐ（－５６３／－３０５）、Ｐ（－４９０／－３０５）和Ｐ（－４３３／－３０５）４个系列删除体和５个定点突变体；启动子活性分析结果表明， Ｐ（－７６１／－５６９）无启动子活性，Ｐ（－５６３／－３０５）、Ｐ（－４９０／－３０５）和Ｐ（－４３３／－３０５）均具有较强的启动子活性，Ｓｐ１结 合位点和核心启动子元件的定点突变可导致ＨＡＳ３启动子活性的降低。结论　 ＨＡＳ３基因的核心启动子区域主要位于其 转录起始位点上游附近－４３３～－３０５ｂｐ内，Ｓｐ１可能在ＨＡＳ３的转录调控中起重要作用。 　　［关键词］　 透明质酸合成酶３；启动子；转录调控 　　［中图法分类号］　Ｒ３９４３３；Ｒ３９４．３　　 ［文献标志码］　Ａ Ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｙｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎｏｆｈｕｍａｎｈｙａｌｕｒｏｎａｎｓｙｎｔｈａｓｅ３ｃｏｒｅ ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎ １，２ １，２ １，２ ３ １，２ １，２ １，２ １，２ ＪｉＹｉｎｇ ，ＬｉｕＺｈｕ ，ＡｉＱｉｎｇ ，ＺｈｕＪｉａｎｇ，ＸｉｅＭｅｎｇｙｕ ，ＷｅｎｇＨｕａｌｉ ，ＬｉｕＧｅｌｉ ，ＳｏｎｇＦａｎｇｚｈｏｕ ，ＢｕＹｏｕ １，２ １ ２ ｑｕａｎ （ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＭｏｌｅｃｕｌａｒＭｅｄｉｃｉｎｅａｎｄＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＢａｓｉｃＭｅｄｉｃａｌ ３ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＯｔｏｌａｒｙｎｇｏｌｏｇｙ，ＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌ，ＣｈｏｎｇｑｉｎｇＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｏｎｇｑｉｎｇ，４０００１６，Ｃｈｉｎａ） 　　［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　 Ｔｏｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉｌｙｉｄｅｎｔｉｆｙａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｔｈｅｃｏｒｅｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｇｉｏｎｆｏｒｈｕｍａｎ ｈｙａｌｕｒｏｎａｎｓｙｎｔｈａｓｅ３（ＨＡＳ３）ｇｅｎｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　 ＴｈｅｐｒｅｖｉｏｕｓｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄＨＡＳ３ｐｒｏｍｏｔｅｒｒｅｐｏｒｔｅｒ， Ｐ（－７６１／－３０５），ｗａｓｕｓｅｄａｓｔｅｍｐｌａｔｅｔｏｍａｋｅｆｏｕｒｄｉｆｆｅｒｅｎｔｄｅｌｅｔｉｏｎｍｕｔ