千层塔中iii型聚酮合酶基因的克隆、表达及功能鉴定.pdfVIP

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2016-05-14 发布于安徽
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千层塔中iii型聚酮合酶基因的克隆、表达及功能鉴定.pdf

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药学学报 Acta Pharmaceutica Sinica 20 11, 46 ( 10) : 1273 1278 ·1273 · 千层塔中III 型聚酮合酶基因的克隆、表达与功能鉴定 1 1* 1 1 1 2 2 叶金翠 , 张萍 , 孙洁胤 , 郭潮潭 , 陈国神 , 阿部郁朗 , 野口博司 ( 1. 浙江省医学科学院物研究所, 浙江杭州 310013; 2. 日本静冈县立大学学院, 日本静冈) 摘要: III 型聚酮合酶是以合成聚酮类化合物为主的一类重要生物合成酶。本文利用逆转录聚合酶链反应从中草药千层塔新鲜嫩叶中扩增聚酮合酶基因, 得到一个III 型聚酮合酶全长cDNA 。该基因全长1 212 bp, 编码404 个氨基酸。与已知的其他植物来源的聚酮合酶氨基酸序列有约 50%～66% 的同源性。cDNA 经双酶切后克隆至 pQE81L, 导入大肠杆菌 (E. coli) M 15 中表达, 产生大量带寡聚组氨酸标记的重组酶, 重组酶分子质量大小约为46.4 kDa 。酶活性鉴定研究表明, 该重组酶可催化芳香族底物、脂肪族底物生成系列非天然聚酮产物, 尤其是其可催化N- 甲基邻氨基苯甲酰CoA 和丙二酰CoA 生成1, 3-二羟基-N - 甲基-吖啶酮, 吖啶酮生物碱一直被认为只能由吖啶酮合酶合成。该工作为研究千层塔中III 型聚酮合酶在天然药物石杉碱甲生物合成中的作用奠定基础。关键词: 千层塔; III 型聚酮合酶; 基因克隆中图分类号: R931 文献标识码:A 文章编号: 05 13-4870 (20 11) 10-1273-06 Cloning, expression and functional identification of a type III polyketide synthase gene from Hup erzia serrata 1 1* 1 1 1 YE Jin-cui , ZHANG Ping , SUN Jie-yin , GUO Chao-tan , CHEN Guo-shen , 2 2 ABE Ikuro , NOGUCHI Hiroshi (1. Institute of Materia Medica, Zhej iang Academy of Medical Sciences, Hangzhou, 310013, China; 2. School of Pharmaceutical Sciences, University of Shizuoka, Shizuoka, Japan) Abstract: A