色谱第7章毛细管电泳详解.ppt

毛细管 毛细管是CE的核心部件之一。早期研究集中在毛细管直径、长度、形状和材料方面，目前集中在管壁的改性和各种柱的制备。 管壁改性主要是消除吸附和控制电渗流，通常采用动态修饰和表面涂层两类方法。 HPCE对检测器灵敏度要求相当高，故检测是CE中的关键问题。迄今为止除了原子吸收光谱与红外光谱未用于HPCE外，其它检测手段均已用于HPCE。 检测器 类型 检测限/mol 特点 紫外-可见 10-13～10-15 加二极管阵列，光谱信息 荧光 10-15～10-17 灵敏度高，样品需衍生 激光诱导荧光 10-18～10-20 灵敏度极高，样品需衍生 电导 10-18～10-19 离子灵敏，需专用的装置 毛细管电泳的分类 毛细管区带电泳 ?CZE? 毛细管等速电泳 ?CITP? 毛细管胶束电动色谱(MECC) 毛细管凝胶电泳 ?CGE? 毛细管等电聚焦 ?CIEF? * CZE分离机理是基于各被分离物质的净电荷与其质量比(荷质比)间的差异。 CZE常用介质为电解质水溶液，根据情况可加入不同有机溶剂或其它添加剂。 迄今CZE仍是应用最多的模式，应用范围包括氨基酸、肽、蛋白、离子、对映体拆分和其它带电物质的分离。 * 毛细管区带电泳 CZE * - + 0 tm (min) * CZE电泳出峰顺序 以被分离物质的荷质比间的差异产生分离效果。 对于正电荷，荷质比越大，t越小；对于负电荷，荷质比越大，t越大。 所有中性物质的迁移率均与介质相同，因此无法分离。 * CZE的分离特点 离子淌度 与其所带电荷q成正比，与粒子半径r和溶液黏度η成反比 电渗流EOF pH值越高，EOF越大 盐浓度越高，EOF越小 温度升高，EOF加快，扩散快，分离效率降低 * CZE相关参数 可用于分离中性化合物 原理和操作与CZE相同，唯一差别是在缓冲溶液中加入离子型表面活性剂。 常用添加剂：十二烷基硫酸钠SDS * 毛细管胶束电动色谱 MECC 毛细管胶束电动色谱 MECC SDS浓度高于临界胶束浓度时，疏水端在水相中相互聚集，形成疏水内核、外部带负电的胶束(伪固定相)。 SDS带负电荷，向正极移动(ν电泳)；溶液向负极移动(ν电渗流 )，ν电渗流 ν电泳 中性分子在胶束相和溶液(水相)间分配。 极性小的化合物在胶束相中浓度大，停留时间长，迁移时间接近胶束出峰时间；反之，接近EOF出峰时间。 常用的表面活性剂 阴离子型：十二烷基硫酸钠SDS 阳离子型：十二烷基三甲基氯化铵DTCA 非离子型：辛基葡萄糖苷 手性：环糊精 用途 中性物质分离 区分手性化合物 氨基酸、肽类、小分子物质、药品样品及体液样品 * 毛细管胶束电动色谱 MECC 阳离子分析 迁移方向和电渗流方向一致 4.5 min内分离了24种金属离子 阳极进样，阴极检测 具有很高的灵敏度 * 应用举例 检测体液或细胞中某些代谢产物的分析 尿液中的氨基酸含量作为临床诊断糖尿病的辅助手段 采用毛细管区带电泳方式，在11min内分离17种药物 * 应用举例 23种氨基酸的毛细管胶束电动色谱图 * 应用举例 * * * LOGO 第7章 毛细管电泳Capillary Electrophoresis 内容提要 概述 HPCE的基本原理 电泳、淌度、电渗 毛细管电泳仪 毛细管电泳的分类 毛细管区带电泳 (CZE) 毛细管等速电泳 (CITP) 毛细管胶束电动色谱 (MEKC) 毛细管凝胶电泳 (CGE) 毛细管等电聚焦 (CIEF) * 概述 毛细管电泳(capillary electrophresis, CE)，又称高效毛细管电泳(high performance capillary electrophresis, HPCE) 以毛细管为分离通道，以高压直流电场为驱动力，以样品的多种特性(电荷、大小、等电点、极性、亲和行为、相分配特性等)为根据的液相微分离分析技术。 * 发展简史 1981 75μm内径的毛细管 1984 毛细管胶束电动色谱 1987 毛细管等电聚焦 1988-1989 CE商品仪器 1989 第一届国际毛细管电泳会议 * 概述 分离的一般过程 分离方法 萃取、沉淀结晶、升华蒸馏、过滤、降沉、离心、色谱、电泳、筛分 分离的特点 混合的逆过程 需外力的推动 不同组分差速运动过程 * 概述 数学描述 差速运动过程 定时分离— L = vtR