经皮肾活检术.ppt

肾活检组织光镜和免疫荧光标本的制备及检查 大连市中心医院肾内科 于晓霞 前 言 光镜、免疫荧光、电镜观察肾活检组织结构对诊断各种类型的肾小球疾病有重要意义 标本处理及制片质量的好坏，与诊断的难易及准确与否有着极为密切的关系 必须重视标本制备中的每个细小环节 准备工作 生理盐水浸透纱布（潮湿拧不出水） 纱布及编号的胶布置培养皿备用 清洁5ml小瓶，加光镜固定液3ml（10％的中性福尔马林溶液），盖塞紧后备用 清洁5ml小瓶内加冷电镜固定液3ml置冰瓶（4%戊二醛） 肾活检标本的初步处理 取材判断 皮质组织 皮髓交界组织 皮质-髓质-皮质组织 仅取得髓质组织则为取材不成功 取材判断 判断已取组织：肾组织，肌肉、脂肪、结缔组织等 用解剖显微镜或放大镜判断肾组织部位（皮质和髓质，有无肾小球），及时与术者联系 肾皮质色淡，见分布不规则，朦胧的红色小点（肾小球）。随经验积累，可肉眼判定 立即置肾组织于蜡板上，迅速测量其长度（cm），记录 、分割，迅速固定 取标本部位、量重要。如无肾小球或皮质1 cm，考虑再次穿刺 标本分切法 取组织长1.5cm~2.0cm最佳（1次） 小镊子将组织轻置蜡板上，镜下观察、量长度 锐利刀片切割组织1mm、2mm及4mm数段 先供电镜标本，要求皮质1mm（肾小球1个） 其次免疫病理，需组织约2mm（肾小球3~5个） 余组织供光镜（肾小球10个） 标本分切法 肾活检穿刺组织的分取 肾活检穿刺组织的分取 LM：光镜；IF：免疫荧光；EM：电镜 标本的处理 光镜 分切后的组织平放蜡板上（勿扭曲） 小镊子沾少许光镜固定液于组织表面，约30″ 组织稍硬后，再将整条组织放入固定液内（这样固定的组织平整、不易弯曲，便于切出完整的切片） 标本的处理 免疫荧光及免疫酶标 分切后的组织迅速置预冷的培养皿内的湿纱布中 置冰瓶即送至恒温冷冻切片机内（-30℃）进行包埋、切片 如不能即切片，标本必须置-40℃~-70℃冰箱保存（保持抗原活性，防止抗原移位或流失），但放置时间不宜2d 标本的处理 电镜 将分切后的肾组织即浸4%的冷戊二醛固定液中，置冰瓶内送至电镜室 注意事项 短时完成观察和分切标本，注意保持肾组织湿润，切勿使其干涸 解剖显微镜光源不宜太强，否则观察组织易干涸，不易看清肾小球 免疫荧光用的肾组织必须避免接触固定液，尤其含酒精固定液（避免影响冰冻切片结果）；电镜和光镜固定液不得互相混淆 动作轻柔夹取未固定组织，勿牵扯组织，避免人为因素造成组织细胞变形 肾活检标本光镜检查 HE PAS PASM Masson 肾活检标本免疫荧光检查 MN-IgG IgAN-IgA LN-IgM 免疫荧光 电 镜 常用染色 HE PAS Masson PAM-Masson 刚果红 油红“O” 光 镜 IgA IgG 小 结 按指南要求安全开展肾活检 确保取材符合要求 技术工作是正确诊断的保证 谢谢！