发酵工程制药.ppt

第三章 发酵工程制药 第一节 概述 微生物发酵技术 1857年法国化学家、微生物家巴斯德提出了著名的发酵理论：“一切发酵过程都是微生物作用的结果。” 巴斯德认为，酿酒是发酵，是微生物在起作用；酒变质也是发酵，是另一类微生物在作祟；随着科学技术的发展，可以用加热处理等方法来杀死有害的微生物，防止酒发生质变。 同时，也可以把发酵的微生物分离出来，通过人工培养，根据不同的要求去诱发各种类型的发酵，获得所需的发酵产品。  一、发酵的定义 1、传统发酵 2、生化和生理学意义的发酵 3、工业上的发酵 1、传统发酵 最初发酵是用来描述酵母菌作用于果汁或麦芽汁产生气泡的现象，或者是指酒的生产过程。 2、生化和生理学意义的发酵 指微生物在无氧条件下，分解各种有机物质产生能量的一种方式，或者更严格地说，发酵是以有机物作为电子受体的氧化还原产能反应。 如葡萄糖在无氧条件下被微生物利用产生酒精并放出CO2。 3、工业上的发酵 泛指利用微生物制造或生产某些产品的过程 包括： 1.厌氧培养的生产过程，如酒精，乳酸等。 2.通气（有氧）培养的生产过程，如抗生素、氨基酸、酶制剂等。 产品有细胞代谢产物，也包括菌体细胞、酶等。 发酵工程定义 ? 发酵工程是渗透有工程学的微生物学。 它是一门将微生物学、生物化学和化学工程学的基本原理有机的结合起来，利用微生物的生长和代谢活动来生产各种有用物质的工程技术。由于它以培养微生物为主，所以又称微生物工程。 是将传统发酵技术与DNA重组、细胞融合、分子修饰和改造等新技术结合并发展起来的现代发酵技术。 发酵工程制药的研究范畴 1、抗生素 2、维生素 3、氨基酸 4、核苷或核苷酸 5、药用酶和辅酶 6、其它药理活性物质 维生素 发酵生产的维生素，1982年世界产量为6万吨左右，六种维生累的总销额为6.7亿美元。在1969—1980年间，每年销售量递增10×，1981—1991年间仍以7一8％的速率递增。 目前，全球范围内使用最为普遍的是VA、VC 和VE，三都每年市场销售额近20亿美元，其中VE超过10亿美元，其余为VB族，每个品种都有0.5-1.5亿美元的市值。在各种用途中，维生素作为动物饲料的市场正以每年2-3％速度增长，在药用和食品领域都以4-5％的速度增长 。 发酵工程的生产流程 发酵工业的生产过程： 原料预处理 培养基配置 发酵设备和培养基的灭菌 菌种制备 工艺特点与要求 A.菌种制备 品系纯正、生产能力高、遗传稳定 无污染、生命力强、保存期短 严格消毒灭菌 定期分离复壮 冷冻干燥管或液氮管保存菌种 微生物菌种保藏技术 在生产发酵中，具有高产有重要经济价值的某一期待代谢产物主能力的微生物菌种的保存和长期保藏，对于一成功的工业发酵过程极为重要。 一、理想的菌种保藏方法应具备的条件 (1)? 经长期保藏后菌种存活健在； (2)?保证高产突变株不改变表型和基因型，特别是不改变初级代谢产物和次级代谢产物生产的高产能力。 (3) 菌种保藏的基本措施是低温、干燥、真空。 国际重要菌种保藏机构 中国菌种保藏单位 二、工业微生物菌种保藏技术 (1)超低温或在液氮中冷冻保藏； (2)冷冻干燥或真空干燥保藏； (3)?转接培养或斜面传代保藏； (4)土壤或陶瓷珠等载体于燥保藏 菌种保藏方法 2.1 冷冻保藏 冷冻保藏为保藏微生物菌种的最简单而有效的方法。 通过冷冻，使微生物代谢活动停止。一般而言，冷冻温度愈低，效果愈好。为了获得满意的冷冻结果，通常应在培养物中加入一定的冷冻保护剂。冷冻保藏时温度要求在-20℃以下，同时应认真掌握好冷冻速度和解冻速变。 冷冻深藏的缺点之一是培养物运输较困难。 冷冻保藏种类 一、普通冷冻保藏技术(-20℃) 二、超低温冷冻保藏技术(-60 -80℃) 三、液氮冷冻保藏技术 普通冷冻保藏技术(-20℃) 将液体培养物或从琼脂斜面培养物收获的细胞分接到试管，然后贮藏于一冰箱的冷藏室中，或于温度范围在-5～-20℃的普通冰箱(-20℃)中。或者，将菌种培养在小的试管或培养瓶斜面上，待生长适度后，将试管或瓶口用橡胶塞严格封好，同上置于冰箱中保存。 用此方法可以维持若干微生物的活力1—2年 应注意的是经过一次解冻的菌株培养物不宜再用来保藏。 保藏过程中应注意控制保藏温度，培养瓶或试管应严格密封。 这一方法虽简便易行，但不适宜多数微生物的长期保藏。 二、超低温冷冻保藏技术(-60--80℃) 要求长期保藏的微生物菌种，一般都要求在-60℃以下进行保藏。 在超低温冷藏柜中保藏菌种的一般方法是： 1．离心收获对数生长中期至后期的微生物细胞； 2．用新鲜培养基重新悬浮所收获的细胞； 3．加入等