第六亲和分离技术.ppt

手性分子印迹拆分技术 物理拆分：结晶技术 化学拆分 生物拆分 色谱拆分：手性柱， 分子印迹拆分， 手性流动相拆分 手性拆分技术 ? 1 2 3 布洛芬、萘普生和酮洛芬的结构图 1,Ibuprofen; 2,naproxen; 3,ketoprofen 手性分子印迹拆分技术 (S)-萘普生MIP的高效液相色谱评价 a b 分子印迹聚合物的高效液相色谱评价 1.(R)-萘普生，2.(S)-萘普生 a为印迹柱上的分离谱图 b为空白柱上的分离谱图 布洛芬、酮洛芬与萘普生外消旋物的分离谱图 1. 外消旋布洛芬，2. 外消旋酮洛芬 3.(R)-萘普生， 4.(S)-萘普生 (S)-萘普生印迹柱印迹专一性的进一步验证 * 定义：指在反胶团相中除通常的表面活性剂以外，添加另一种亲水头部为亲和配基的助表面活性剂（cosurfactant）； 通过亲和配基与目标分子的亲和结合作用，促进目标产物在反胶团相的分配。 6.5亲和反胶团萃取 亲和反胶团萃取过程 反萃取 膜亲和介质MAC-His-NL66的制备过程 聚丙烯亲和膜的制备 聚丙烯膜多用辐射诱导接枝甲基丙烯酸缩水甘油酯（GMA）的方法进行活化，接枝的GMA环氧基可用以键合配基，剩余环氧基要转变为二醇基，或采用其他试剂封闭，降低非特异性吸附。同时GMA还起到了间隔臂的作用。 Kim等人在聚丙烯中空膜上辐射诱导接枝上GMA，用苯丙氨酸、色氨酸做配基，吸附?-球蛋白。 聚砜亲和膜的制备 聚砜（PS）虽是一种良好的成膜材料，但其具有的憎水性使它不能直接用作亲和分离介质，必须进行化学改性，变成具有一定亲水性的膜才能使用。 聚砜膜的改性方法通常有以下几种： 1）在膜表面键合一层亲水物质如纤维素、壳聚糖。可以利用聚砜 膜的末端酚羟基与1,2-亚乙基二醇缩水甘油醚（EGDGE）反应产 生末端环氧基，然后键和羟乙基纤维素形成一层亲水层，然后键 和配基。键和亲水性基团后，膜的非特异性吸附很小，但孔径缩 小，膜的渗透率下降 2）引入亲水性基团，商振华等采用酰化-胺化和氯甲基化等途径对 聚砜膜进行改性，在芳环上引入末端氨基。改性后膜孔隙率大， 孔径分布均匀，有良好的通透性 3）采用金属化试剂，如(butycithim)将聚砜膜改性成聚砜锂，用环 氧化合物进行改性，可衍生出许多亲和膜，如金属亲和膜 亲和膜合成中活化试剂的选择： 基质与所键合物质上可反应基团的种类、耐受pH 范围及形成键的稳定性，这直接决定了亲和介质 的使用寿命 所用试剂的毒性及价格，各种活化试剂各有利 弊，有的活化时间短，有的毒性低，有的形成的 键稳定，因此须根据实验室实际情况及实验目的 进行选择 亲和膜的活化 常用的活化方法： （a）环氧氯丙烷 （b）1,1-羰基双咪唑（CDI） （c）过碘酸钠 （d）三氯三嗪 （e）戊二醛 （f）双环氧试剂 吸附模型 一般情况下，配基与底物的结合可近似用langmuir吸附方程表示，由于亲和膜分离过程的复杂性，这种处理是很粗略的： 式中：qm－最大吸附量 Kd －吸附平衡常数 C－进料浓度 q－膜吸附量 6.3.3 亲和膜分离的理论模型 对多克隆抗体，langmuir吸附方程式明显不能解释配基与目标产物之间的规律，因此有人提出三参数模型： 式中： 0≤a≤1，其余字母意义同上 参数a值越接近1，说明物系的亲和力均匀性越好，这一模型的适用性为亲和吸附动力学及分离过程的研究提供了依据。 亲和膜分离的理论模型 关于配基－底物结合的一般关系式目前还没有发现，langmuir模型目前只适用于少数物系，如亲和力均匀的单克隆抗体相同三参数模型只能一定程度上拟合多克隆抗体物系，原因在于多克隆抗体物系结合亲和力不均匀，其主要原因是由于抗体对某一特定抗原决定簇的异质性所致。 亲和膜分离的理论模型 亲和膜过程传质模型 由于亲和膜分离过程非常复杂，目前对亲和分离的处理部分仍是经验式的，真正基于