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空中课堂讲义六 现代生物科技专题 典型例题1嗜热土壤芽胞杆菌产生的β-葡萄糖苷酶（BglB）是一种耐热纤维素酶，为使其在工业生产中更好地应用，开展了以下试验： Ⅰ.利用大肠杆菌表达BglB酶 （1）PCR扩增bglB基因时，选用____________基因组DNA作模板。 （2）右图为质粒限制酶酶切图谱。bglB基因不含图中限制酶识别序列。为使PCR扩增的bglB基因重组进该质粒，扩增的bglB基因两端需分别引入____________和____________不同限制酶的识别序列。 （3）大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因为____________。 Ⅱ.温度对BglB酶活性的影响 （4）据图1、2可知，80℃保温30分钟后，BglB酶会____________；为高效利用BglB酶降解纤维素，反应温度最好控制在____________（单选）。 A.50℃???? B.60℃????? C.70℃????? D.80℃ Ⅲ.利用分子育种技术提高BglB酶的热稳定性 在PCR扩增bglB基因的过程中，加入诱变剂可提高bglB基因的突变率。经过筛选，可获得能表达出热稳定性高的BglB酶的基因。 （5）与用诱变剂直接处理嗜热土壤芽胞杆菌相比，上述育种技术获得热稳定性高的BglB酶基因的效率更高，其原因是在PCR过程中____________（多选）。 A.仅针对bglB基因进行诱变???? B.bglB基因产生了定向突变 C.bglB基因可快速累积突变???? D.bglB基因突变不会导致酶的氨基酸数目改变 【答案】（1）嗜热土壤芽孢杆菌 （2）NdeⅠ?BamHⅠ （3）转基因的大肠杆菌分泌出有活性的BglB酶 （4）失活? B （5）A、C 典型例题2 为了获得植物次生代谢产物,先用植物外植体获得愈伤组织,然后在液体培养基中?悬浮培养。 请回答下列问题: (1)外植体经诱导后形成愈伤组织的过程为?? ???。? (2)在愈伤组织悬浮培养时,细胞干重、蔗糖浓度和 pH 的变?化如右图所示。 细胞干重在 12 d 后下降的原因有? ??????;培养液中蔗糖的作用是???? ???、????????????。?(3)多倍体愈伤组织细胞产生的次生代谢产物量常高于二倍体。 二倍体愈伤组织细胞经??处理,会产生染色体加倍的细胞。 为检测愈伤组织细胞染色体数目,压片前常用纤维素酶和???酶解离愈伤组织。 若愈伤组织细胞(2n)经诱导处理后,观察到染色体数为8n 的细胞,合理的解释是?? ???、 ?? ???。 答案：（1）脱分化? （2）蔗糖浓度下降，pH 降低??? 提供能源??? 调节渗透压 （3）秋水仙素（低温）?? 果胶??? 经加倍到4n 的细胞处于有丝分裂后期??? 经加倍到8n 的细胞处于有丝分裂中期（4）①③④ 典型例题3 人组织纤溶酶原激活物（htPA）是一种重要的药用蛋白，可在转htPA基因母羊的羊乳中获得。流程如下： （1）htPA基因与载体用_________切割后，通过DNA连接酶连接，以构建重组表达载体。检测目的基因是否已插入受体细胞DNA，可采用_________技术。（2）为获取更多的卵（母）细胞，要对供体母羊注射促性腺激素，使其__________。采集的精子需要经过__________，才具备受精能力。（3）将重组表达载体导入受精卵常用的方法是__________。为了获得母羊，移植前需对已成功转入目的基因的胚胎进行__________。利用胚胎分割和胚胎移植技术可获得多个转基因个体，这体现了早期胚胎细胞的__________。?（4）若在转ht-PA基因母羊的羊乳中检测到__________，说明目的基因成功表达。 答案：（1）同种限制性核酸内切酶（或同种限制酶）；　　 DNA分子杂交（或核酸探针）（2）超数排卵；　　 获能（处理）（3）显微注射法；　　 性别鉴定；　　　 全能性（4）htPA（或人组织纤溶酶原激活物） 1、对下图所示DNA片段的说法错误的是(　　) A．甲、乙、丙的黏性末端是由三种限制酶催化产生的 B．甲、乙之间可形成重组DNA分子，但甲、丙之间不能 C．DNA连接酶催化磷酸基团和核糖之间形成化学键，该反应有水产生 D．切割甲的限制酶不能识别由甲、乙片段形成的重组DNA分子 2、下图为利用生物技术获得生物新品种的过程，有关说法错误的是 A．A