一氧化氮人类生物学的新英雄.教案分析.ppt

一氧化氮：人类生物学的新英雄  NO简介 一氧化氮 　　化学式NO，分子量30，氮的化合价为+2。无色气体，难溶于水。NO分子中有一未配对电子,可形成自由基,和其它分子如氧分子、超氧自由基,或过渡金属反应。在体内极不稳定, 半衰期仅为3～5 s。NO具有脂溶性,可以快速透过生物膜扩散,在体内迅速被血红蛋白、氧自由基或氢醌等灭活。  在我们的印象中，NO是一种大气污染物,是吸烟,汽车尾气及垃圾燃烧等释放出的有害气体,可破坏臭氧层导致酸雨,甚至致癌,它还曾作为化学毒剂应用于战争. 但诺贝尔获得者路易斯·伊格纳罗，罗伯特·弗奇戈特和穆拉德 他们的开创性的呈现一氧化氮的好的一面。 并由他们成果，使我们认识到： NO是机体内一种作用广泛而性质独特的信号分子,在神经细胞间的信息交流与传递,血压恒定的维持,免疫系统的宿主防御反应中等方面,都起着十分重要的作用,并参与机体多种疾病的发生和发展过程. 1998 Nobel MP 获奖人简介 NO是体内重要信号分子的发现过程 穆拉德（Ferid Murad）的发现 穆拉德研究cGMP（环磷酸鸟苷）。设法从cGMP产物中分离出一种与之类似的蛋白质——可溶性鸟苷酸环化酶 （GC）。意外证实 NO可活化 GC和松弛平滑肌。 操作发现： 1、为检测这种分离出来的GC，加入一些化学物质，除去某些可能影响cGMP产物的杂蛋白，发现有些物质能活化GC，使GC生产出更多cGMP。 2、把这些物质加入到气管、肠等不同组织，发现不但能活化GC，还使这些组织的平滑肌松弛。 纵上发现，包括硝化甘油在内的一些已知血管松弛剂也能活化GC。活化GC是这些物质的共性，而且它们都通过反应形成NO。 由此他认为一氧化氮可能是一种对血流具有调节作用的信使分子,但当时这一推测缺乏直接的实验证据。 弗奇戈特（Robert F.Furchgott）的发现 相同条件下? ????????????? ↗?扩张? Ach→【血管】→?没明显作用????????？?????? ↘?收缩? 研究? Ach→血管内表皮完整→血管扩张? 推测? Ach→血管内皮细胞→新信使分子→血管平滑肌舒张→血管舒张??????? （EDRF） ??????????????????? Furchgott发明了“三明治”血管灌流模型解释了刺激内皮细胞可引起血管平滑肌舒张的原因 实验步骤： （1）正常血管及与内膜摩擦处理后的比较； （2）正常血管环与胶原酶处理（化学损伤内皮）后相比较 （3）a、横血管条（与管壁平滑肌走向一致）并去内皮，b、纵血管条（与平滑肌垂直）含内皮，c、a与b并列挂在同一个浴槽，内膜面相近且相对，d、c实验完后立即移除b（ sandwich preparation的“三明治”血管灌流模型）； NO发现前期的关键时刻，新技术员革新了组 织切片制作和染色的方法 为了证明血管内皮细胞与血管反应性有关这一观点，Furcllgott把做完实验的标本送给一位组织学家做切片标本来观察，但遗憾的是这位技术人员经切片、固定、染色送回的切片都不含内皮细胞(加工中被破坏)，也就是说这一组织学结果排除了内皮细胞在舒缩反应中的重要性。但庆幸的是，半年后该实验室来了一名新技术员，他改进了组织切片染色的方法，而终于发现内皮的有无是舒张的关键，于1979年Furchgott公开明确提出血管内皮细胞与血管反应性有关。 伊格纳罗(Louis J. Ignarro)的发现 首先，一系列研究结果提示EDRF和NO的生物学性质相似。EDRF能够激活鸟苷酸环化酶（GC），引起血管平滑肌中环磷酸鸟苷（cGMP）水平的升高，产生内皮依赖性血管舒张效应。该过程可以被亚甲基蓝（MB），氧基血红蛋白和氧基肌红蛋白抑制，这些特点与NO引起血管舒张的过程相同。 其次，利用灌流-生物检定法，证明EDRF和NO的化学性质十分相似，如EDRF性质不稳定，半衰期约是3-5秒，可以被超氧阴离子灭活，超氧化物歧化酶能使EDRF的半衰期延长到30秒。最后证明，EDRF 和NO 激活GC 的过程都具有亚铁血红素依赖性。 和血红蛋白（Hb）相互作用前，Hb的最大吸收峰在433nm， EDRF和血红蛋白（Hb）相互作用后， Hb的最大吸收峰移动到406nm。NO和Hb反应时也同样具有上述变化。 以上结果从不同侧面证明，EDRF就是NO