第六章冷冻真空干燥技术wang重点分析.pptVIP

保护剂：指保护细胞、微生物、寄生虫等活力和酶、激素、免疫反应物等活性的一类物质，又称稳定剂。冻干保护剂是指在冻干过程中及其后使制品的活性物质免受破坏的一类物质。 保护剂用途：不同用途加不同保护剂, 主要针对活的微生物或细胞。 ① 菌种或毒种保存：常用甘油作保护剂 ② 细胞株保存：常用二甲基亚砜 (DMSO) ③ 疫苗冷冻真空干燥制备时：加脱脂乳（或二 甲基亚砜）和蔗糖等（不同国家有不同配方） ④ 干扰素类生物活性物质的保存：加葡聚糖 保护剂的分类 分类： （根据其作用机理） ——渗透剂：如二甲基亚砜（DMSO）、甘油和蔗糖等。 ——非渗透剂：如聚乙烯吡咯啶酮 (PVP) 和蛋白质等。 （根据其分子量大小） ——高分子物质、低分子物质。 （按其化学性质） ——复合物、糖类、盐类、醇类、酸类和聚合物 。 ?复合物 脱脂乳、明胶、蛋白质、蛋白胨、糊精、血清、甲基纤维素等 糖类 蔗糖、乳糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖等 盐类 乳酸钙、谷氨酸钠、氯化钠、氯化钾、醋酸铵、硫代硫酸钠等 醇类 山梨醇、甘油、甘露醇、肌醇、木糖醇等 酸类 柠檬酸、酒石酸、氨基酸等 聚合物 葡聚糖、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等 一些常用的冷冻干燥保护剂 分 类 保 护 剂 1. 营养液： 可修复因冻干而受损的细胞，使冻干制品含有一定量水分； 可促进高分子物质形成骨架，使冻干制品呈多孔的海绵状，增加溶解度。 包括糖类（如葡萄糖、乳糖、蔗糖、棉子糖等）和氨基酸类（如谷氨酸、天门冬氨酸、精氨酸等）。 冻干保护剂组成 2. 赋形剂： 防止低分子物质的碳化和氧化，保护活性物质不受加热影响； 使冻干制品形成多孔性、疏松的海绵状物，增加溶解度。 如白蛋白、血清、明胶、脱脂乳、淀粉等。 3. 抗氧化剂： 抑制冻干制品中的酶作用，增加生物活性物质在冻干后贮存期间的稳定性，如维生素C、维生素E和硫代硫酸钠等。 保护剂的功能 ① 保护微生物和活性物质在冻干过程中因理化因素的影响或损伤，维持较高的存活率和活性。 例如：菌苗的活菌数、疫苗的病毒滴度、酶的活性等； ② 使微生物、活性物质处于半静止或静止状态，以延长生命、活性期。 ③ 活性物质在冻干过程中保持原有的构架， 使制品形成海绵状结构。 ④ 抗氧化剂能抑制氧化作用，从而维持微 生物、活性物质稳定以及静止状态。 ① 防止活性物质失去结构水及阻止结构水形成结晶而导致生物活性物质的损伤； ② 降低细胞内外的渗透压差、防止细胞内结构水结晶，以保持细胞的活力； ③ 保护或提供细胞复苏所需的营养物质，有利于生活力的复苏和迅速修复自身。 冻干保护剂作用机制 1、保护剂种类: 利用不同保护剂冻干的同一种微生物的保存期的存活率不同。 如：分别用7.5％葡萄糖肉汤和7.5％乳糖肉汤作保护剂冻干的沙门氏菌，在室温保存7个月后的细菌存活率分别为35%与21%。 因此要根据微生物种类或者用途来添加不同 种类保护剂。 影响保护剂效能的因素 因此保护剂浓度要严格按照配方执行。 2、保护剂浓度： 以大肠杆菌加不同浓度葡萄糖作保护剂 进行冻干，并测定冻干品的细菌存活率， 证明 5~10％葡萄糖存活率最高。 （3）保护剂配制方法 例如含糖保护剂灭菌温度不宜过高，否则由于糖的炭化而影响冻干制品的物理性状和保存效果，所以均以114℃、30min灭菌或间歇灭菌。 又如血清保护剂就不能用热灭菌法，必须以滤过法除菌。 （4）保护剂 pH 保护剂的pH应与微生物生存时的pH相同或相近，过高或过低都能招致微生物的死亡。 例如明胶蔗糖保护剂的pH以6.8~7.0为最佳，否则会造成微生物大量死亡。 又如含葡萄糖、乳糖保护剂经高压灭茵后能或多或少改变保护剂的pH值，从而影响保护效果，为此最好采取滤过除菌。 因此，每种新的冻干制品在批量生产前应进 行系统的最佳保护剂选择试验，包括 : ① 保护剂冻干前后的活菌数、病毒滴度和效 价测定的比较试验 ② 不同保存条件和不同保存期的比较试验 ③ 即使在冻干制品投产以后，仍须根据条件 的改变不断作选择试验，以改进冻干制品 的质量 。 1、细菌保护剂 ① 需氧或兼氧厌氧菌：５％蔗糖脱脂乳或10％ 蔗糖、 1.5％