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第十章 免疫分析 免疫分析方法—是研究免疫学的一种工具。是利用抗体和抗原在琼脂介质中扩散、泳动等反应特性进行的。 优点： 特异性强，分辨率高，应用较普遍 第一节 抗体的性质、制备及纯化 一、抗体的性质  抗原免疫动物产生的抗体是血清γ-球蛋白的一部分。 可用下面的经典实验证明： 取两份抗卵清蛋白的兔血清，其中一份加入纯化的卵清白蛋白，待抗体沉淀后与另一份兔血清进行电泳图谱比较。结果是在经卵清蛋白沉淀抗体后的血清中，γ-球蛋白的量大大降低。显然，抗体是存在于血清的γ-球蛋白部分。 从实验发现，抗体的理化性质及结构是与γ-球蛋白相近的。  γ-球蛋白是一组结构相似，但又有差异的蛋白质，通常称之为免疫球蛋白（immunoglobulin）。该蛋白用Ig表示。按其结构和免疫化学方面的差异性，又可分为五类，称之为同类免疫球蛋白。 每一类免疫球蛋白还可分为不同亚类，这些亚类称为同种异型免疫球蛋白。 这类蛋白质的95％氨基酸排列顺序是相同的，而明显差别是在肽链之间的二硫键数目、位置和绞链区（连接Fd和Fc碎片的肽段）的氨基酸排列顺序。各亚类还能依据γ-球蛋白分子与抗原结合部位相邻近区域的结构的不同而进一步分级。 1．抗原 是指进入异种机体后，能致敏淋巴细胞、能与抗体发生特异性结合的物质。这种特异性称为抗原性。 抗原性包括： 免疫原性—指诱导特异免疫反应的能力抗原特异性—指与抗体特异结合的能力 完全抗原：具有这两种能力的物质半抗原：有些小分子物质，只有抗原特异性而无免疫原性 （1）抗原的性质 ① 决定簇—抗原分子表面的某些化学基团 作用：直接决定免疫化学反应的特异性 决定特异性的强弱的因素： 　1） 抗原分子量和暴露在其分子表面决定簇的量 2）亲水性能抗原分子量越大，暴露在其分子表面的决定簇越多、亲水性能越好，特异性就越强；反之，则特异性就越弱。 ② 构象 抗原的空间结构对免疫化学反应的特异性有明显的影响。若抗原（蛋白质）变性或结构松散，都会使抗原的性质发生很大变化。 ③ 异己性 获得抗原的动物和被免疫动物不属同一类，这种抗原称为异己性抗原。 若属同一类动物的抗原，一般无免疫原性，或有弱免疫原性。而异己性抗原，则具有免疫原性。 若获得抗原的动物与被免疫的动物在分类学上相差越远（即亲缘关系相差大），则免疫原性越强。反之，则免疫原性越弱。 ④ 电荷 抗原分于上分布有一定数量的电荷。它可使抗原的亲水性增强，促使抗原与抗体之间的离子相互结合，以利于增加抗原的特异性。 （2）抗原的制备 动物的免疫系统非常敏感，对极微量的抗原也能产生相应的抗体。因此，如需制备一种纯抗体时，就得先制备一种同质性抗原。获得的制品应在聚丙烯酰胺凝胶电泳过程呈一条区带，而无杂带。 如果蛋白质由数个亚基构成，每个亚基也许有多个抗原决定簇，就会产生一组不同比例的抗体，因此，欲得到特异性很高的抗体，就须使用抗原为一种亚基的物质。 为获得理想的抗原，须注意： （1）最常用的载体蛋白有来自牛和人的血清白蛋白、卵清白蛋白和甲状腺球蛋白等。因为它们溶解度好、决定簇多，免疫原性强，且有适当的结合位点。 （2）小分子物质与蛋白质之间的结合比例控制在 3:1-4.5:1 时，一般认为免疫反应强烈。 （3）当半抗原有多种基团时应选择一种对免疫识别不明显的基团与载体结合。 2．免疫 （1）动物的选择 选择年幼、成熟，且健壮的豚鼠、鸡、兔、猴、山羊、绵羊、猪和马等为免疫动物。需少量血清时，以选用白兔为宜，大量的血清时，选用羊和马为宜。 马抗血清与抗原反应的比例范围是极其狭窄的，不论抗原过量，还是抗体过量，免疫复合物均呈可溶状态。 兔抗血清与抗原反应的比例范围较宽，当抗体过量时，免疫复合物几乎不产生溶解现象；但当抗原过量时，免疫复合物也会产生部分溶解现象。 （2）佐剂（adjuvant） 指与抗原混合注射入机体后，能增加抗原的免疫性，或能改变免疫反应类型的一种物质。 ① 分类有机：胞壁酸二肽、多糖类物质和福氏佐剂无机：明矾福氏佐剂公认较好，有明显的免疫刺激作用。 免疫佐剂的作用 1）延缓抗原的释放，保护抗原不被水解，佐剂可延长抗原在体内滞留时间，避免频繁注射，有利于高亲和力抗体的产生； 2）活化巨噬细胞并促进巨噬细胞与T和B细胞的相互作用，从而对淋巴细胞有特异性加强刺激的作用； 3）佐剂吸附了抗原后，增加了抗原的表面积，使抗原易于被巨噬细胞吞噬； 4）佐剂能刺激吞噬细胞对抗原的处理； 5）可刺激致敏淋巴细胞的分裂和浆细胞产生抗体。故免疫佐剂的作用可使无免疫原性物质变成有效的免疫原； 6）可提高机体初次和再次免疫应答的抗体滴变； 7）改变抗体的产生类型以及产生迟发型变态