华中科技大学生理实验_new_new重点分析.docx

华中科技大学生命科学与技术学院 生理学实验报告 专业 生物技术 班级 生实1301 姓名 陈云丰 学号 U201312485 实验一 蛙离体心脏灌流 一、实验目的及要求 学习离体蛙心灌流法。 观察Na+，K+，Ca2+及肾上腺素，乙酰胆碱对离体心脏活动的影响。 二、实验原理 心脏的正常节律性活动需要一个适宜的内环境（如Na+，K+，Ca2+等的浓度及比例、pH值和温度），而内环境的变化则直接影响到心脏的正常节律性活动。在体心脏还受交感神经和迷走神经的双重支配，交感神经末梢释放去甲肾上腺素，使心肌收缩力加强，传导速度加快，心率加快；迷走神经末梢释放乙酰胆碱，使心肌收缩力减弱，心肌传导速度减慢，心率减慢。将失去神经支配的离体心脏保持于适宜的理化环境中（如任氏液），在一定时间内仍能产生自动节律性兴奋和收缩。离体心脏脱离了机体的神经支配和全身体液因素的直接影响，可以通过改变灌流液的某些成分，观察其对心脏活动的作用。心肌细胞的自律性、兴奋性、传导性及收缩性，都与钠、钾及钙等离子有关。外源性给予去甲肾上腺素或乙酰胆碱可产生类似心交感神经或迷走神经兴奋时对心脏的作用。 三、实验对象、器材及药品 实验对象：青蛙 实验器材：计算机生物信号采集与处理系统、张力换能器、蛙类常用手术器械一套、玻璃分针、蛙板、蛙钉、蛙心插管、蛙心夹、烧杯、细线、滴管等 实验药品：任氏液、一定浓度的NaCl、CaCl2、KCl溶液、肾上腺素、乙酰胆碱 实验方法与步骤 斯氏蛙心插管法 青蛙双毁髓后背位置于蛙板上，打开胸腔，暴露心脏。仔细识别心脏周围的大血管。在主动脉干下方穿双线，一条在左主动脉上端结扎作插管时牵引用；另一根在动脉球上方打一活结备用（用以结扎和固定插管）。左手提起左主动脉上方的结扎线，右手持眼科剪在左主动脉根部（动脉球前端）沿向心方向剪一斜口，将盛有少许任氏液、大小适宜的蛙心插管由此开口处轻轻插入动脉球。当套管尖端到达动脉圆锥基部时，将套管稍稍后退，使尖端向动脉圆锥的背部后下方及心尖方向推进，经主动脉瓣插入心室腔内。（可见套管中血液冲入套管，并使液面随心脏搏动而上下移动，表明操作成功)。用滴管吸去套管中的血液，更换新鲜任氏液。将动脉球上已准备好的松结扎紧，并固定于插管侧面的钩上，以免蛙心插管滑出心室。剪断结扎线上方的血管，轻轻提起插管和心脏，在左右肺静脉和前后腔静脉下引一细线并结扎，于结扎线外侧剪去所有相连的组织则得到离体蛙心。用任氏液反复换洗插管内的任氏液，直到插管中无残留血液为止。 将插好离体心脏的套管固定在支架上，用连有细线的蛙心夹夹住少许心尖部肌肉，将细线以适宜的紧张度与张力换能器相连。张力传感器的输出线与计算机生物信号采集处理系统的输入通道相连。 实验步骤 （1）记录心脏在只有任氏液时的收缩曲线，观察心率及收缩幅度，并将其作为正常对照。 （2）Na+的作用：用吸管吸出插管中的任氏液后，换以等量的NaCl溶液，记录并观察心跳的变化。有变化出现时，应立即将插管内液体吸出，并以等量任氏液换洗2～3次，至心跳恢复正常。 （3）Ca2+的作用：将1～2滴CaCl2溶液加入灌流液中，记录并观察心跳变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳曲线恢复正常。 （4）K+的作用：将1～2滴KCl溶液加入灌流液中，记录并观察心跳变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳曲线恢复正常。 （5）肾上腺素的作用：将1～2滴肾上腺素加入灌流液中，记录并观察心跳变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳曲线恢复正常。 （6）乙酰胆碱的作用：将1～2滴乙酰胆碱加入灌流液中，记录并观察心跳变化。有变化出现时，应立即以等量任氏液换洗数次，至心跳曲线恢复正常。 五、实验结果及分析 正常搏击曲线图 现象：正常情况下，蛙心以一定频率跳动 Na+对蛙类离体心脏活动的影响 现象：心搏曲线基线下降，说明Na+对蛙类心脏的收缩性起抑制作用，使心脏的收缩力降低。同时心搏曲线由密变疏，说明心率减慢。 解释：心肌细胞的兴奋-收缩偶联在很大程度上依赖于胞外内流的Ca2+，而当Na+浓度升高时，Na+与Ca2+竞争性地与肌钙蛋白结合，使得Ca2+与肌钙蛋白的结合能力降低，从而使钙内流减少，因此心肌收缩力减弱。同时K+浓度大大下降，无法维持胞内高K+的状态，使得静息电位进一步增大，出现超极化，细胞需要更高的时间到达阀值，因此心率下降。 3、Ca2+对蛙类离体心脏活动的影响 现象：心搏