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RNAi——回顾 生物通技术特刊：RNAi技术专辑之一： RNAi的回顾　 ??? （生物通编译）近年来的研究表明,一些小的双链RNA可以高效、特异的阻断体内特定基因表达，促使mRNA降解，诱使细胞表现出特定基因缺失的表型，称为RNA干扰（RNA interference，RNAi，也译作RNA干预或者干涉）。它也是体内抵御外在感染的一种重要保护机制。由于可以作为一种简单、有效的代替基因敲除的遗传工具，可以毫不夸张的说，RNAi正在功能基因组学领域掀起一场真正的革命，并将彻底改变这个领域的研究步伐。为此被Science评为2001年最重要的的成果之一。...... 前言???? ??? 转录后基因沉默（Post-transcriptional gene silencing，PTGS), 原来曾经一度被认为是矮牵牛和少数几种植物的特殊现象，如今已成为分子生物学领域最热门的研究课题之一了(1)。在过去的几年中，研究表明这种现象在植物和动物中都会发生，并且参与抵抗病毒感染、转座子沉默机制（transposon silencing mechanisms）等过程。其中最引人注意的，就是RNA干扰（RNA interference,RNAi，也有译作RNA干预或者干涉）——引入双链RNA（dsRNA），?通过特异性结合互补链从而抑制基因的表达，或者说是通过双链RNA引发转录后沉默，从而作为一种抑制细胞中某个基因表达的有力工具。(reviewed in 1-3). ??? RNAi是如何被发现的？以怎样一种机制工作？更重要的是如何利用这项强大的技术进行功能基因组的研究？本文将概要的介绍并将提供大家一些相关的资料。 ??? 20多年前，在对矮牵牛（petunias）进行的研究中有个奇怪的发现：Rich Jorgensen和同事将一个能产生色素的基因置于一个强启动子后，导入矮脚牵牛中，试图加深花朵的紫颜色，结果没看到期待中的深紫色花朵，多数花成了花斑的甚至白的。Jorgensen将将这种现象命名为协同抑制cosuppression，因为导入的基因和其相似的内源基因同时都被抑制。 (1-5). ??? 开始这被认为是矮牵牛的特有的怪现象，后来发现在其他许多植物中，甚至在真菌中也有类似的现象，特别是在脉孢霉Neurospora中进行了详细的研究(在这里被称为 quelling ）(1-3)。 ??? 然而是什么原因导致这种基因沉默的现象呢？尽管对于部分植物来说，转基因引发的基因沉默可能是因为基因特异的甲基化而导致，这被称为转录阶段基因沉默（transcriptional gene silencing, or TGS)，但是，确实有部分的植物中的基因沉默是在转录后发生的，称为post-transcriptional gene silencing, or PTGS)。实验（Nuclear run-on experiments）表明同源转录本确实有出现，但是很快在胞浆中被降解，没有积聚 (1, 3, 6)。 ??? 转基因会引发PTGS，然而silencing也可能被一些病毒诱发 (2, 3)。一旦被引发，PTGS由一种可扩散的反式作用分子介导。这首先在脉孢霉Neurospora中得到证实：Cogoni和他的同事发现基因沉默可以在异核体的细胞核之间传递(1, 7)。后来Palauqui和同事进一步证实，在植物中，将出现转基因导致基因沉默的植物嫁接到另一没有基因沉默的植物中，同样可以导致PTGS。在后来线虫和果蝇的实验中我们知道导致植物中的PTGS的反式作用因子是双链RNA(1-3) 　 RNAi是在线虫中发现的。 ??? 首次发现dsRNA能够导致基因沉默的线索来源于线虫Caenorhabditis elegans的研究。7年前（1995）康乃尔大学的研究人员Guo和Kemphues尝试用反义RNA去阻断 par-1 基因的表达以探讨该基因的功能，结果反义RNA的确能够阻断par-1 基因的表达，但是奇怪的是，注入正义链RNA作为对照，也同样阻断了基因的表达(9)。 ??? 这个奇怪的现象直到3年后才被解开——华盛顿卡耐基研究院的Andrew Fire和马萨诸塞大学癌症中心的Craig Mello首次将dsRNA——正义链和反义链的混合物注入线虫，结果表现出比单独注射正义链或者反义链都要强得多的基因Silencing。实际上每个细胞只要很少几个分子的dsRNA已经足够完全阻断同源基因的表达。后来的实验表明在线虫消化道中注入双链RNA不单可以阻断整个线虫的同源基因表达，还会导致其第一代子代的同源基因沉默。他们将这种现象称为RNA干扰（RNA interference ,简称RNAi，10） ??? RNAi潜在的作用促使Fire和Timmon