DNA重组的基本工具张.ppt

细菌“吐出”蚕丝 固定空气中的氮 微生物产生出人的胰岛素、干扰素等珍贵的药物 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 人类需要的基因产物 剪切 → 拼接 → 导入 →表达 什么叫基因工程？ 从大肠杆菌中提取质粒 提取目的基因 限制酶 目的基因与运载体结合 DNA连 接酶 目的基因导入受体细胞 目的基因的表达与检测 基因工程操作的基本步骤 培育抗虫棉需要哪些工具？ 分子手术刀—限制性核酸内切酶 分子缝合针—DNA连接酶 分子运输车—基因进入受体细胞的载体 专题一 第1节DNA重组技术的基本工具 思考 在自然界中有一些生物的DNA可能进入另一种生物的细胞中。我们有没有学过相关的实例？ 噬菌体侵染细菌实验 1、来源： 2、作用特点 3、结果： 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶（简称限制酶） 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 2.作用特点： ①一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列； EcoRⅠ SmaⅠ GAATTCCTTAAG CCCGGGGGGCCC ②只能在特定的切点切割； G A A T T C C T T A A G C C C G G G G G G C C C 中轴线 中轴线 1、来源： 2、作用特点 3、结果： 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 ①一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列； ②只能在特定的切点切割； ③切断磷酸二酯键 1、来源： 2、作用特点 3、结果： 一、 “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 主要是从原核生物中分离纯化出来的一种酶。 ①一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列； ②只能在特定的切点切割； ③切断磷酸二酯键 形成两种末端 黏性末端 平末端 以下是两种不同的限制酶切割形成的 DNA片段： （1）——CTGCA ——G （2）——G ——CTTAA （4） G—— ACGTC—— （3）AATTC—— G—— 你能用DNA连接酶将它们连接起来吗？ 和 能连接； 和 能连接。 1 4 2 3 二、DNA连接酶—— “分子缝合针” DNA重组技术的基本工具 1.分类： ⑵T4 DNA连接酶 2.作用： ⑴E·coli DNA连接酶 连接磷酸二酯键 E.Coli DNA连接酶：连接黏性末端 T4 DNA连接酶：连接黏性末端和平末端 T4 DNA连接酶还可把平末端之间的缝隙 “缝合”起来，但效率较低 DNA连接酶和DNA聚合酶有何相同点和不同点？ DNA连接酶 DNA聚合酶 连接DNA链 连接部位 相同点 双链 单链 在两个DNA片段之间形成磷酸二酯键 将单个核苷酸加 到已存在的核酸 片段的3’末端的 羟基上，形成磷 酸二酯键 都能形成磷酸二酯键， 二者都由蛋白质构成 二、DNA连接酶—— “分子缝合针” DNA重组技术的基本工具 1.分类： ⑵T4 DNA连接酶 2.作用： ⑴E·coli DNA连接酶 连接磷酸二酯键 1.载体需要的条件： ⑴对受体细胞无害 ⑵有1到个多个限制酶切点 ⑶能够自我复制 ⑷有标记基因 三、基因进入受体细胞的载体 —“分子运输车” 如果载体对受体细胞有害将怎样？ 作为载体没有切割位点将怎样？ 假如目的基因导入受体细胞后不能复制将怎样？ 目的基因是否进入受体细胞，你如何察觉？ 2.常用运载体： ⑴细菌的质粒 裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外，并具有自我复制能力的很小的双链环状DNA分子。 能复制并带着插入的外源基因一起复制 有切割位点 有标记基因的存在，便于重组DNA的鉴定和选择。 拟核 2.常用运载体： ⑴细菌的质粒 ⑵噬菌体或动植物病毒 小结 基因工程 的工具 限制酶 主要存在于原核生物中 识别特定序列，切断磷酸二酯键 产生平末端和黏性末端 DNA连 接酶 连接磷酸二酯键 种类 E.coliDNA连接酶 T4 DNA连接酶 运载 工具 具备的 条件 对受体细胞无害 能自我复制并稳定存在 有一个多个限制酶切位点 有标记基因 常用载体： 质粒、λ噬菌体衍生物、 动植物病毒