内生细菌提高向日葵幼苗在水分胁迫条件下的生长能力,产生水杨酸,并抑制病原菌生长教程分析.doc

内生细菌提高向日葵幼苗生长，产生水杨酸，并抑制病原菌生长内生细菌菌株SF2（与木糖氧化无色杆菌）水分胁迫敏感B59和水胁迫B71和商业混合帕莱索24。例如，固定大气中的氮，溶解磷铁，或增强植物激素的生产（二）提高植物对环境胁迫的耐受性在农业作物的根际土壤中引入有益的细菌棉花黄萎病菌感染的最初症状是（对水分胁迫敏感），B7-l（宽容的水应力），和商业混合帕莱索24，商业混合帕莱索24进行接种试验。包含无菌蛭石的108 CFU ml-1），1mlLB培养基添加到未接种的幼苗上（对照），幼苗通过毛细管虹吸蒸馏水浇灌。 一组接种的幼苗用半强度的霍格兰溶液浇灌。其它两组用6000浓度的聚乙二醇来产生Wa=-048和Wa=-0.96与半强度的霍格兰溶液混合浇灌。 接种后的第14天，收获种苗。记录根和茎的干物质（DM）的值。每一组实验的每一个处理都设置了4个重复，得到4个重复的实验结果。 水杨酸（SA）的评价细胞密度为1010?CFU?ml-1）13.7%聚乙二醇6000（WA?=-2.03?MPa）（细胞密度为108?CFU ml-1）（WA?=?-1.12?MPa） 将它们以8000 rpm离心，4?C，20分钟(2H4)-SA。每个样品均分两步进行2ml乙酸乙酯添加和蒸干。将残渣用50II甲醇溶解，每10II注入LC-MS/MS。实验设置5个重复。 高效液相色谱法 使用联盟2695（分离模块，沃特斯，美国）配备自动取样器的四元泵来执行分析。Restek C18（Restek，USA）2.1?9?100毫米，5）0.2%醋酸的水溶剂B）[t (min), % A]:(0, 40), (25, 80),再平衡7min。 质谱法 MS/MS实验在Micromass Quatro UltimaTM PT双四级质谱仪（micromass，曼城，英国）使用涡轮离子喷雾源双毛细管电压V?–?3000能量35?V锥射频lens1（20）射频lens2（0-3）源的温度- 100，?380 C，A/B (40:60, v/v).流动相中稀释为浓度为10纳克II-1个人的水杨酸标准溶液。MS/MS产物离子通过在双四极质谱计的碰撞细胞碰撞活化解离[M–H]-做水杨酸谱。由于许多化合物可能存在相同的标称分子量I = [(C - T)/C] 9100, 控制C菌丝和T菌丝在每个平板的直径，实验设置六个重复。 统计分析 在水杨酸水平对抗真菌的效果进行对根和茎DM的进行统计测试水平的方差分析，并对数据进行事后多重范围试验。使用非参数检验（Kruskal–Wallis）来检测细菌颗粒对黄萎病的效果（图6）和水杨酸/茉莉酸对链格孢和核盘菌的影响（图5a，b），使用软件为Statgraphics Plus, v.3 (Manugistics,Rockville, MD, USA).。 结果 正常条件下和水分胁迫条件下幼苗接种SF2、SF3、SF4的效果 在有无接种菌株的条件下监测不同基因型的向日葵对水分胁迫敏感度的反应，评估胁迫对根与芽影响的早期植物响应。 在正常生长条件下(Wa = -0.2 MPa)，三株菌株都接种的商业混合帕莱(Fig. 1a)。在Wa = -0.48 MPa，与未接种菌株的种苗相对比，SF3和SF4接种的芽干物质分别增加了1.29倍和1.43倍（图1b）。在 Wa = -0.96 MPa，接种任意3株菌株的芽的干物质都只是有少量的增加。 在Wa =-0.2 MPa，接种SF3幼苗的根部干物质显著增加而接种SF2和SF4增加程度较小（图1d）。在适度的胁迫条件下(Wa = -0.48 MPa)，SF3和SF4增加了根部的干物质。在严重胁迫条件下(Wa =-0.96 MPa),三株菌株均能显著增加根部的干物质（图1f） 图1正常生长和水分胁迫条件下，商业混合帕莱索24幼苗 (Wa = -1.12 MPa)。在聚乙二醇存在的条件下，产生-2.03MPa的水势来进行激素评价。 在LB培养基中，Wa=-1.12MPa条件下，SF3和SF4产生大量的水杨酸。SF2生产的水杨酸含量(16 pmol ml-1)低于SF3 (238 pmol ml-1)和SF4 (270 pmol ml-1)。在水分胁迫条件下(Wa = -2.03 MPa)，3株细菌生产水杨酸的能力均显著增加（图4）。 图4 在LB培养基（WA?=?-1.12?MPa）和LB与PEG混合培养基（WA?=?-2.03?MPa）实验。值表示不同字母表示在0.05差异显著P值表示不同字母表示在0.05差异显著P值表示不同字母表示在0.05差异显著P商业混合帕莱索24和耐旱自交系iturin bacillomicine，和一些其它物质，都具有抗菌特性。在我们的研究中，茉莉酸比水杨酸能够更有效的抑制病原