纳米二氧化钛佐剂效应.doc

硕士学位论文 纳米TiO2/Fe3O4@TiO2的佐剂 效应研究 随着纳米科技的发展，纳米材料被广泛的应用于各个领域，尤其在生命医学领域，纳米材料发挥了巨大的作用，纳米材料具有靶向性、缓释放性等，使得它成为一种良好的药物运输载体。纳米二氧化钛作为一种常用的无机材料，制作工艺简单，性能稳定，成本低廉，在环保、卫生保健、化妆品等领域有着广泛的应用。纳米二氧化钛在市场上被认为是一种安全无毒的材料，其对于DNA以及蛋白物质具有很强的吸附作用，并且在一定浓度范围内能够激活机体免疫反应，因此，本研究将纳米二氧化钛作为一种潜在的免疫佐剂进行研究，其有望解决目前市场上佐剂安全性和广谱性不高的问题。此外，还研究了磁性纳米二氧化钛Fe3O4@TiO2)的作用，可以加强材料的靶向性。 本研究主要围绕纳米二氧化钛以及磁性纳米二氧化钛作为免疫佐剂这个主题，对两种材料进行全面的考察。首先对于合成的材料进行物理化学表征，考察了材料的生物相容性，之后考察了材料对于小鼠树突状细胞DC)的作用机制，最后将Ovalbumin, OVA)蛋白作为模式抗原，考察了纳米二氧化钛以及磁性纳米二氧化钛与OVA的结合情况，以及材料蛋白复合体的细胞吞噬情况。 本研究的主要工作如下： 第一，溶胶-凝胶法合成磁性二氧化钛，合成后的磁性纳米二氧化钛与原有的纳米二氧化钛粒径大小分别为63nm、82nm。表面电荷分别为30.2mv、41.5mv。磁性纳米二氧化钛的磁感应强度为12.9 emu/g。合适的粒径大小保证了材料能够被抗原程度细胞antigen-presenting cells,APC）吞噬，表面带有正电荷，使得材料容易与负电荷的生物大分子结合，并且磁性纳米二氧化钛的磁感应强度合适作用于生物体内。 第二，分别与293T细胞、RAW264.7细胞、DC细胞孵化24h后，细胞存活率均高于80%，说明材料具有比较低的毒性。25μg/ml 50 μg/ml浓度材料溶血率低于5%，说明材料具有较好的生物相容性，可以用于静脉注射。 第三，磁性纳米二氧化钛以及纳米二氧化钛，能够促进DC细胞成熟，上细胞表面共刺激因子的表达，增加促炎症因子TNF-α的分泌，磁性纳米二氧化钛磁性纳米二氧化钛以及纳米二氧化钛能够上调核转录因子NF-κB的表达。 第四，磁性纳米二氧化钛以及纳米二氧化钛能与OVA蛋白通过静电作用相结合，3h材料蛋白结合物的细胞吞噬率比单纯的蛋白细胞吞噬率显著增加了30% 40%，并且这样一个吞噬过程是主动耗能的。 关键词：二氧化钛， 磁性二氧化钛， 树突状细胞， 免疫佐剂 ABSTRACT With the development of nanotechnology, nanomaterials are widely used in many fields. Nanomaterial plays an important role in biomedical field. Its targeted and sustained release properties make it a good drug delivery vector. As a commonly used inorganic material, titanium dioxide (TiO2) nanoparticles are increasely used in environmental protection, health care and cosmetics because of its simple manufacture technology, high stability and low cost. In the market, TiO2 is seemed to be a safe material with no toxicity. They are easily to bind with DNA or proteins and can also activate immune response in certain concentrations. Since the daily used adjuvants with low spectrum and safety, So we made further investigations about TiO2 and treated it as a potential candidate of adjuvant. To make the nanoparticles more targeted, we also investigated magnetic TiO2 (Fe3O4@TiO2). Our primary goal here