第四章细胞变异与筛选10-10详解.pptVIP

体细胞无性系变异的普遍性 变异是普遍现象，不限于特定的物种、器官，所涉及的性状也相当广泛。研究表明，经组织培养产生的变异要比常规繁殖方法产生的植株表现更多的变异。体细胞无性系变异的变异率可以高达30-40%，有时甚至高达100%，某一具体性状的变异率在0.2-3%之间。 离体培养再生植株的表型变异频率 植物种类 再生植株来源 变异频率(%) 烟草 体细胞愈伤组织 10 水稻 胚愈伤组织 71.9 甘蔗 幼叶愈伤组织 18 玉米 体细胞愈伤组织 14 大麦 花粉植株 10－15 马铃薯 叶肉原生质体 100 菠萝 顶芽愈伤组织 7 腋芽愈伤组织 34 幼果愈伤组织 100 无性系变异的影响因素 供体植物 遗传背景 倍性水平，二倍体比单倍体稳定 基因型 生理状态 来源于茎尖的愈伤组织的DNA含量及染色体数的稳定性好于来源于薄壁细胞的 继代培养的次数 培养基及培养方式 不同的激素浓度可以有选择地诱导不同倍性的细胞的分裂。 豌豆，低浓度2,4-D(0.25 mg/L)－－多倍体 高浓度2,4-D(20 mg/L)－－二倍体 激素除了引起染色体倍性的增加外，在一些培养中还发现染色体倍性减少的现象。 蚕豆，无激素－多倍体发生频率＝6.31% 10 mg/L NAA，2.5 mg/L KT-单倍体＝13.3％ 培养天数 不同DNA值细胞比例（％） 2C 2c~4c 8c 8c or 8c 0 88.3 11.7 5 80.7 16.8 2.5 13 4.8 79.5 6.6 9.1 17 9.7 81.5 7.9 0.9 硬粒小麦中胚轴培养中DNA值的变化 高浓度2,4－D AgNO3 6－BA 高浓度6－BA 蔗糖浓度 培养初期 增加染色体 变异频率 降低变异频率 无明显影响 对最初9代callus染色体变异无明显影响 长期培养 加大超倍体细胞频率 9代之后，低浓度蔗糖时，亚倍体细胞频率明显减少 体细胞无性系变异的类型 遗传变异(genetic variation)：是获得新种质的有效途径。 非遗传变异 生理适应(physiologic adaptation)：遗传物质没有发生改变，由于某种外界条件存在而引起的性状变异，会随着外界因素的消失而消失 后生遗传变异(epigenetic variation)： 体细胞无性系变异的遗传基础 外因导致DNA复制和细胞分裂增殖中DNA和染色体脱离常规，导致培养物及再生植株的形态结构的改变。 染色体数目变异、结构变异、基因突变、DNA总量变异和DNA重复序列拷贝数的变异、基因丢失、DNA碱基修饰、转座子的激活、基因重排等 染色体数目的变化（最常见的变化） 内源有丝分裂导致多线染色体或内源多倍体 多级纺锤体的出现导致非整倍体或亚倍体 落后染色体导致超倍体和亚倍体细胞 染色体结构的变化，出现缺失，倒位，易位和断裂等。 无丝分裂不正常是导致单倍体、多倍体、亚倍体和非整倍体的重要原因。 1)从再生植株中直接筛选有用突变株 2)对离体培养物的筛选 第四节 植物体细胞无性系突变体的筛选 体细胞无性系突变体筛选方法 突变体筛选 方法 直接选择法 间接选择法 绿岛法 正选择法 负选择法 直接选择法 正选择法：用一种含有特定物质的选择培养基，在其上只有突变的细胞能够生长，非突变细胞不能生长，从而直接筛选出突变体的办法。 小麦幼胚愈伤组织--1.4%NaCl N6培养基＝＝小麦耐盐系。 负选择法（富集选择法，又称浓缩法 ）： 在特定培养基中，让正常细胞生长繁殖，突变体细胞受抑制不分裂呈休眠状态，然后用一种能毒害正常生长细胞，而对休眠细胞无害的药物淘汰正常细胞，再用正常培养基恢复突变体生长。 该方法主要应用于营养缺陷型突变体筛选。 间接选择法 间接选择法是一种借助于与突变表现型有关的性状作为选择指标的筛选方法。 当缺乏直接选择表型指标或直接选择条件对细胞生长不利时，可考虑采用间接筛选法 如脯氨酸（Pro） 锦橙珠心悬浮细胞--γ射线--高浓度Pro＝＝细胞内Pro含量提高一倍＝＝耐寒愈伤及植株。 抗病突变体的筛选也常常用间接筛选的策略。 绿岛法 绿岛法是利用已分化组织进行筛选和鉴定的方法。对于抗病毒突变体、抗除草剂突变体的筛选，可以采用“绿岛法”。 1)在农业上的应用 创造育种中间材料或直接筛选新品种 在全世界50多个国家中，已培育出1000多个由直接突变获得的或由这些突变体杂交而衍生的品种 通过体细胞诱变选育的谷类作物品种中，品质得到不同程度改良的占34.3％。