脂肪干细胞的三维球形培养.docVIP

脂肪干细胞的三维球形培养 王?婵1，戴?应1，郭永龙1，杨?艳2，刘?庆2，陈建苏1，2 1暨南大学再生医学教育部重点实验室，广东省广州市?510632；2暨南大学医学院眼科研究所，广东省广州市?510632 Three-dimensional spherical culture of adipose-derived stem cells Wang Chan1, Dai Ying1, Guo Yong-long1, Yang Yan2, Liu Qing2, Chen Jian-su1, 2 1Key Laboratory for Regenerative Medicine of Ministry of Education, Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China;?2Institute of Ophthalmology, Medical College of Jinan University, Guangzhou 510632, Guangdong Province, China 摘要? 背景：大多哺乳类细胞在正常生理状态下多以三维结构存在，为还原细胞本身在体内的自然状态，很多研究者开始尝试在体外对细胞进行三维培养，球形培养是一种常见的三维培养模式。 目的：尝试用3种不同的方法在体外对人脂肪干细胞进行球形培养，并观察其生物学特征。 方法：对提取的脂肪来源细胞进行表面Marker流式检测以及成脂成骨诱导鉴定后，证实为脂肪干细胞。先后用低黏附培养法、hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法3种方法在体外对脂肪干细胞进行球形培养，对3种方法形成球形的特点进行比较分析，并通过Imagej软件计算出3组多细胞球体的平均面积，利用Viability/Cytotoxicity Assay Kit for Animal Live Dead Cells试剂盒对3组多细胞球体进行活力检测。 结果与结论：①通过流式细胞术鉴定细胞表型标志物，其中CD29，CD44，CD59完全阳性，同时成脂成骨诱导也为阳性，证实提取的细胞为脂肪干细胞。3代以内脂肪干细胞多呈长梭形，并克隆状生长。②低黏附培养法、hanging-drop培养法、Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞聚集成球形生长，但所成多细胞球形有所差异。低黏附培养法所形成的细胞球形大小不一，不易控制；而hanging-drop培养法和Eppendorf管培养法均可使脂肪干细胞形成大小均一的球形，但在大小和形成时间上有所不同。③3种不同方法所形成的球形细胞均保持较好的细胞活力。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 全文链接： 关键词?：?干细胞；?脂肪干细胞；?诱导分化；?球形培养；?活力；?低黏附培养；?hanging-drop培养；?Eppendorf管培养；?国家自然科学基金； ?? Abstract： BACKGROUND:Many types of mammalian cells aggregate and display three-dimensional multicellular spheroids when they are in normal physiological conditions. In order to observe and explore cellular natural states, many researchers try to use spherical cell culture?in vitro, a common three-dimensional culture pattern. OBJECTIVE:To use three different methods for spherical culture?in vitro?of adipose-derived stem cells and to observe their biological features. METHODS:?Adipose-derived stem cells were confirmed by the analysis of the markers for cell phenotypes as well as adipogenic and osteogenic differentiation potential assays. Three different methods of sphere cultures were used a