胡萝卜组培实验报告详解.doc

本科学生综合性实验报告 学号： 姓 名： 学院： 生命科学学院 专业、班级： 班 实验课程名称： 胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞 悬浮及体细胞胚胎发生培养实验 教 师： 开 课 学 期： 至 学年 学期 填 报 时 间： 年 月 日 云南师范大学教务处编印 实验设计 实验序号 实验一 实验名称 胡萝卜肉质根愈伤组织诱导、继代增殖、细胞悬浮及体细胞胚胎发生培养实验 实验时间 2013年3月-6月 实验室 325 实验内容： 实验1-1 MS培养基母液的配制与保存 实验1-2 MS固体培养基配制 实验1-3 胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养） 实验1-4 胡萝卜愈伤组织培养 实验1-5 胡萝卜愈伤组织继代增殖培养 实验1-6 胡萝卜细胞悬浮培养 实验1-7 胡萝卜愈伤组织器官分化培养 实验目的 1-1：使学生能熟练准确配制MS培养基母液和组培室常用的化学试剂，巩固相关理论基础知识。 1-2：通过MS固体培养基的配制，掌握配制培养基的基本技能。 1-3：使同学能够熟练掌握外植体的表面消毒技术和无菌操作技术，并且基本掌握愈伤组织的诱导培养。 1-4：使同学熟练掌握愈伤组织培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。 1-5：使同学熟练掌握愈伤组织继代增殖培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。 1-6：使同学熟练掌握胡萝卜细胞悬浮培养的基本操作技术，进一步熟悉、规范无菌操作技术。 1-7：?使同学了解胡萝卜愈伤组织器官分化培养的基本操作技术。 二、 实验原理、实验流程 1.实验原理 植物细胞全能性是植物组织培养的细胞基础。生活的植物细胞只要有完整的膜系统和细胞核，它就会有一整套发育成一个完整植株的全部遗传信息，在适当条件下，这些信息可以表达，再生成一个完整植株。 1-1：培养基是植物离体培养组织和细胞赖以生存的营养基质。配制培养基时，为了减少试剂称取时的工作量和少量称取时出现的误差，以及避免多种营养成分混合导致沉淀产生或相互反应而失去培养效果，预先要将各种营养成分配制为一定倍数的培养基母液，待使用时稀释到要求的浓度。母液的浓度为培养基浓度的10倍、20倍、50倍、100倍等或更高。 1-2：将事先配制好的培养基母液按一定比例稀释至浓度为培养基中规定的使用浓度，再加入琼脂、蔗糖、生长调节物质等，制备成符合要求的培养基。 1-3：将胡萝卜的贮藏根（根的变态）表面消毒后切割成小块接种于愈伤组织诱导培养基上，诱导外植体脱分化产生愈伤组织。 1-4：将胡萝卜肉质根诱导产生的愈伤组织，在无菌操作室中切取长势好的愈伤组织部分转接到胡萝卜愈伤组织培养基中，进行胡萝卜愈伤组织培养。 1-5：将胡萝卜愈伤组织转接到愈伤组织继代增殖培养基上培养，即可实现愈伤组织的增殖。 1-6：将增殖的大量胡萝卜愈伤组织转接到胡萝卜悬浮培养基中进行培养。 1-7：将增殖的大量胡萝卜愈伤组织转接到胡萝卜愈伤组织器官分化培养基中培养。 实验流程 （1）实验总体流程： MS培养基母液的配制与保存流程： MS固体培养基配制流程： 胡萝卜肉质根愈伤组织诱导培养（初代培养) 流程： 胡萝卜愈伤组织培养流程： 胡萝卜愈伤组织继代增殖培养流程： 胡萝卜细胞悬浮培养流程： 胡萝卜愈伤组织器官分化培养流程： 实验设备及材料 1、实验材料 新鲜的胡萝卜贮藏根 2、实验设备 （1）主要用具与仪器： 烧杯、容量瓶、搪瓷杯、药勺、称量纸、玻棒、标签纸、pH试纸（pH5.4~7.0），冰箱、普通天平、分析天平、各种型号的试剂瓶（棕色和白色）、移液管、量筒、子、手术剪、解剖刀、已灭菌培养皿、酒精灯、超净工作台、恒温培养箱、摇床、电磁炉、果酱瓶、高压蒸汽灭菌锅、封口膜、棉线、酒精棉球、已灭菌滤纸、镊培养架等。 （2）主要药品和试剂： 盐酸吡哆素、烟酸、肌醇、2,4-D(2,4-二氯苯氧乙酸)、NAA（α-萘乙酸）、硝酸铵、硝酸钾、氯化钙、硫酸镁、磷酸二氢钾、碘化钾、硫酸锰、硫酸锌、钼酸钠、硫酸铜、氯化钴、乙二胺四乙酸二钠、硫酸亚铁、甘氨酸、盐酸硫胺素、 6-BA （ 6-苄基腺嘌呤）、 KT、浓盐酸、氢氧化钠、浓硫酸、重铬酸钾、95%酒精、蒸馏水、琼脂、蔗糖、生长调节物质、蒸馏水、1mol·L-1HCl、1mol·L-1NaOH、 无菌水、75％酒精、0.1%HgCl2。 四、实验方法步骤 1.MS培养基母液的配制 （1）大量元素母液的配制与保存 母 液 种