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第八章 大肠杆菌基因表达系统 克隆基因的表达： 一、原核表达系统的注意事项 乳糖启动子lac 色氨酸启动子trp cI857: 三、外源蛋白在大肠杆菌中的表达部位 2. 周质中表达 （3）常用的原核信号肽 （2）真核信号肽 3. 胞外表达 四、几种类型的原核表达载体 pKK223-3 载体 2. 分泌型表达载体 pIN III-comA1 3. 融合蛋白表达载体系统----pGEX系列 （3）产物提纯 （4）产物分离 pGEX （5）其他融合蛋白系统 （2）-35区与-10区之间的距离 2. 翻译起始序列对表达效率的影响 （2）起始密码AUG 4. 转录终止区对表达效率的影响 六、提高表达水平常用的方法 ?PL启动子是温度诱导型 tac启动子是药物诱导型 （2）表达载体诱导复制 （1）设计成融合蛋白 （2） 使用突变菌株，保护外源蛋白不被降解 （3）表达分泌蛋白 细菌蛋白分泌的条件： AUG左侧的三个碱基也有影响。 ?-半乳糖苷酶的mRNA中： AUG左侧如果是UAU或CUU时，最为有效； 如果是UUC、UCA或AGG时下降20倍。 3. 启动子与外源基因之间的距离 3. 启动子与外源基因之间的距离 5.载体拷贝数及稳定性对表达效率的影响 6.外源蛋白在菌体中的稳定性对表达效率的影响 选择强启动子序列，如tac 等 2. 调整S-D序列与AUG间的距离 3. 改