7第七章+糖类详解.pptVIP

4．凝胶柱色谱 ⑴ 葡聚糖凝胶的性质及其类型 葡聚糖 + 交联剂（环氧氯丙烷）→ 交联葡聚糖（醚桥形式，交联成网状结构） 在酸性环境中能水解，在碱中稳定。 凝胶颗粒的表面有许多孔隙，孔隙大小决定于葡聚糖与交联剂的配比及反应条件。 交联度大→网状结构紧密→孔隙小→吸水膨胀少。 * * 常用商品名称及型号： 葡聚糖凝胶（商品名：Sephadex G） [G代表葡聚糖凝胶] G-10、 G-15 、G-200等 [10—表示干凝胶每1克吸水量乘以10，G-10 的吸水量1.0ml/g] 羟丙酰基交联葡聚糖凝胶（Sephadex LH-20） 为亲脂性的，可在有机溶剂中进行分离的分子筛 * * ⑵ 操作过程 除葡聚糖凝胶LH-20外，均在H2O中进行。 ①将凝胶在适当的溶液中浸泡（一般为洗脱剂）； ②待充分膨胀后装入层析柱； ③用洗脱液洗脱； ④收集、回收溶液，干燥。 * * 5.季铵氢氧化物沉淀法 季铵氢氧化物是一类乳化剂，可与酸性多糖形成不溶性的沉淀，常用于酸性多糖的分离。 6．分级沉淀或分级溶解法 在糖的水溶液中，逐步加入乙醇，即逐渐增大EtOH浓度，可得到各部分的沉淀物。 * * 地黄根中单糖和低聚糖的分离 热EtOH、H2O提 阴阳离子交换树脂（除酸碱成分） 活性炭柱（15%HOAc处理）以H2O、稀EtOH——5、10、15、25%，顺次洗脱，经PC检定，合并 （双糖）（三糖） （四糖） （五糖） 中性成分 D-葡萄糖 D-果糖 蔗糖 D-半乳糖 棉子糖 甘露三糖 水苏糖 毛蕊糖 * * 三、多糖的结构测定 1、纯度测定：与小分子纯度判断方法不一致 可采用以下方法： 旋光测定法；凝胶柱色谱法；HPLC法等 2、相对分子量的测定 一般用软电离方式测定，如FAB-MS, ESI-MS, MALDI-TOF-MS等。 * * 3、多糖中糖组成的测定 部分和完全酸水解得到单糖；再对单糖用GC或HPLC测定。 4、糖链的测定 (1). 糖与糖连接位置的确定：波谱法或GC-MS (2). 糖链连接顺序的确定：2D-NMR * * * * 本章重点 糖类化合物分类及理化性质，提取分离方法 本章难点 糖类化合物的结构解析 * 四、糖衍生物的制备 目的：用于糖的结构鉴定 1. 甲基化：见p210-211 2.三甲基硅醚化：p211 3. 乙酰化 4. 糖氰乙酸酯衍生物 * * §4 糖的结构测定 单糖的鉴定：用TLC与对照品比较； 低聚糖的鉴定：酸水解后鉴定 一、色谱法在糖结构测定中的应用 1. PC 展开剂：BAW = 4:1:5 (上层)；BEW = 4:1:2.2 BBPW = 5:1:3:3 * * 显色剂：邻苯二甲酸—苯胺喷洒后，于105℃加热10min，可观察到棕色或暗褪色斑点。 2. TLC (1). 纤维素薄层色谱： (2). 硅胶薄层色谱 展开剂和显色剂：见p213。 * * 3. GC 低聚糖或多糖需先酸水解成单糖，单糖因难于气化，制备成易于挥发的衍生物如三甲基硅醚衍生物或糖氰乙酸酯衍生物等，再进行分析。 4. HPLC：注意色谱柱、检测器的选择 5. CE（毛细管电泳） 6. FACE（荧光基团辅助的糖电泳） * * 二、波谱分析法在糖类结构测定中的应用 1. IR OH: 3500~3400 cm -1 C=O: 1700 cm -1 （酮糖或糖醛酸） * * α—苷键：υmax 844cm-1 (±8) β—苷键：υmax 891cm-1 (±7) * * 2. NMR （1）1H-NMR共振谱法： 端基质子δ：4.3~5.5；其余δ ：3.4~4.2 偶合常数J: β—苷键：J1，2=7~8Hz α—苷键：J1，2=2~4Hz (2). 13C-NMR 呋喃糖δ吡喃糖δ，可区别环的大小 端基C原子的δ：98~110 β—苷键：δ =103~106 α—苷键：δ =97~101 * * 3. MS 电离方式多样，但因挥发性差，一般不能观察到M 目前多采用ESI-MS法，分析前向溶液中加入微量HAc，能获得较满意的正离子图；结合MALDI-TOF-MS，还可测定糖链的相对分子量及糖链的一级结构。 * * §5 多糖 一、多糖的组成与分类 多糖：又称多聚糖，是由10个以上的单糖分子通过苷键聚合而成。 分子量较大，一般由几百甚至几万个单糖分子组成。 已失去一般单糖的性质，一般无甜味，也无还原性。 * * 多糖大致分为两类： 一类水不溶物，在动植物体内起支持组织的作用，如植物中的纤维素和半纤维素，动物甲壳素等，分子呈直糖链型。 另一类为水溶物，如动植