33蛋白质的二级结构详解.pptVIP

（一）蛋白质的二级(Secondary)结构 定义：是指肽链的主链在空间的排列，或规则的 几何走向、旋转及折叠。它只涉及肽链主 链的构象及链内或链间形成的氢键。 类型：主要有? 螺旋、? 折叠、? 转角、 ? 凸起、 无规卷曲等。 维系二级结构的化学键：氢键（次级键） 2.?折叠（?-pleated sheet） 或?折叠结构或?片或?构象 Pauling等人1951年首先提出 (1)特征 A. ? 折叠是由两条或多条几乎完全伸展的肽链平行排列，通过链间的氢键交联而形成的。肽链的主链呈锯齿状折叠构象。 (3)分布 大量存在于丝心蛋白和?-角蛋白中。 －－? 折叠无弹性，不易被拉长； －－? 螺旋拉长变成?-折叠。 羊毛具有弹性是由于羊毛纤维是由三股右手?-螺旋一起绕同一轴左旋成大螺旋（超螺旋），经拉长后使 ? 螺旋变成 ? 折叠。 ? ? 在? 折叠中出现频率较高的氨基酸残基有Val、Ile、Phe、Tyr、Trp和Thr。 （二）蛋白质的超二级结构和结构域 超二级结构 此概念是由Rossman M.G. 于1973年首次提出 在蛋白质分子中特别是球状蛋白质分子中， 经常可以看到由若干相邻的二级结构元件（主要 是α螺旋和β折叠片）组合在一起，彼此相互作 用，形成种类不多的、有规则的二级结构组合或 二级结构串，在多种蛋白质中充当三级结构的构 件，称为超二级结构(super-secondary structure) 或模体、基序（motif）、折叠花式、折叠单位。 *蛋白质变性学说，我国生物化学家吴宪在1931年提出。 天然蛋白质分子因环境的种种关系，从有序而紧密的结构，变为无序而松散的结构，这就是变性。 他认为天然蛋白质的紧密结构以及晶体结构是由分子中的次级键维系的，所以容易被物理的和化学的因素所破坏。 这种观点基本上反映了蛋白质变性的本质。 蛋白质的去折叠或变性 导致蛋白质变性的因素 物理因素：热、紫外照射、高压、振荡等 化学因素：有机溶剂、强酸、强碱、脲、 盐酸胍、去污剂、重金属盐等 －－脲、盐酸胍，与多肽链竞争氢键，因而破坏蛋白质二级结构；增加非极性侧链在水中的溶解度，降低三级结构中的疏水作用 －－SDS，破坏蛋白质分子内的疏水作用，使非极性基团暴露 －－极端pH，改变蛋白质分子上的净电荷，引起静电排斥和破坏某些氢键 一、蛋白质的酸碱性质和等电点 ◆对某一种蛋白质来说，在某一pH，它所带的正电荷与负电荷恰好相等，也即净电荷为零,该pH称为蛋白质的等电点 三、蛋白质相对分子质量的测定 （二）凝胶过滤法测定相对分子质量 利用凝胶过滤（gel filtration）可把蛋白质混合物按分子的大小分离开来。 该法较简便，不要求复杂的仪器就能相当精确地测出蛋白质的相对分子质量 洗脱曲线 （三）SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子 质量 电泳时，大分子的迁移率决定于它所带的净电荷以及分子大小和形状等因素 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS) 1967年Shapiro等人发现，若在聚丙烯酰胺凝胶系统中加入阴离子去污剂十二烷基硫酸钠（SDS）和少量巯基乙醇，则蛋白质分子的电泳迁移率（e1ectrophoretic mobility）主要取决于它的相对分子质量，而与原来所带的电荷和分子形状无关。 电泳迁移率（μR）与多肽链分子量的对数有下列关系 a和b 、 K1 和 K2都是常数 以几种相对分子量已知的标准蛋白质的Mr的对数值对μR作图，根据待测样品的μR ，从其标准曲线上查出分子量 （五）超离心法测定相对分子质量 利用超速离心机测定蛋白质或其他生物大分子的相对分子质量，常用的有两种方法： （1）沉降速率法(sedimentation velocity) （2）沉降平衡法(sedimentation equilibrium) －－被认为是最准确可靠的方法 沉降速率法 ● 超速离心 ● 单位（cm）离心场的沉降速度是个定值，称为沉降系数 (sedimentation coefficient)或沉降常数，用s (小写) 表示 ● 蛋白质、核酸等生物大分子的沉降系数大 小在1× 10-13秒到200× 10-13秒的范围； 为方便起见，将10-13秒作为一个单位称为斯维得贝格单位(Svedberg unit)或称沉降系数单位，用S（大写）表示 斯维得贝格方程 在相同的实验